西北大学学报（自然科学版）
西北大學學報（自然科學版）
서북대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2009年
5期
801-804,813
,共5页
冯劼%朱娟莉%董兆麟%陈超
馮劼%硃娟莉%董兆麟%陳超
풍할%주연리%동조린%진초
人免疫缺陷病毒Ⅰ型%gp 120%基因克隆%蛋白表达%毕赤酵母
人免疫缺陷病毒Ⅰ型%gp 120%基因剋隆%蛋白錶達%畢赤酵母
인면역결함병독Ⅰ형%gp 120%기인극륭%단백표체%필적효모
目的 用巴斯德毕赤酵母系统表达HIV外膜糖蛋白gp120.方法 将从HIV-1型国际标准株pHXB2-gp160的基因序列中扩增出的gp 120分子的长片段基因(1 419 bp)和短片段基因(417bp)分别克隆入真核表达载体pPICZαA与pPICZB中,以电穿孔法转化酵母GS 115.用YPDS-zeo平板筛选重组子、PCR方法检测整合到酵母菌GS 115基因组中的gp 120片段基因,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物.结果 诱导后gp 120短片段多肽在GS 115中少量表达,在诱导表达24 h重组蛋白表达量及抗原性达到最高,表达产物被降解,具有良好的抗原特异性.诱导后gp 120长片段多肽未被GS 115所表达.结论 在巴斯德毕赤酵母中成功表达gp 120分子长片段需要优化gp 120基因,为制备HIV-1的诊断抗原和基因工程重组疫苗打下基础.
目的 用巴斯德畢赤酵母繫統錶達HIV外膜糖蛋白gp120.方法 將從HIV-1型國際標準株pHXB2-gp160的基因序列中擴增齣的gp 120分子的長片段基因(1 419 bp)和短片段基因(417bp)分彆剋隆入真覈錶達載體pPICZαA與pPICZB中,以電穿孔法轉化酵母GS 115.用YPDS-zeo平闆篩選重組子、PCR方法檢測整閤到酵母菌GS 115基因組中的gp 120片段基因,經甲醇誘導錶達後,SDS-PAGE和免疫印跡分析錶達產物.結果 誘導後gp 120短片段多肽在GS 115中少量錶達,在誘導錶達24 h重組蛋白錶達量及抗原性達到最高,錶達產物被降解,具有良好的抗原特異性.誘導後gp 120長片段多肽未被GS 115所錶達.結論 在巴斯德畢赤酵母中成功錶達gp 120分子長片段需要優化gp 120基因,為製備HIV-1的診斷抗原和基因工程重組疫苗打下基礎.
목적 용파사덕필적효모계통표체HIV외막당단백gp120.방법 장종HIV-1형국제표준주pHXB2-gp160적기인서렬중확증출적gp 120분자적장편단기인(1 419 bp)화단편단기인(417bp)분별극륭입진핵표체재체pPICZαA여pPICZB중,이전천공법전화효모GS 115.용YPDS-zeo평판사선중조자、PCR방법검측정합도효모균GS 115기인조중적gp 120편단기인,경갑순유도표체후,SDS-PAGE화면역인적분석표체산물.결과 유도후gp 120단편단다태재GS 115중소량표체,재유도표체24 h중조단백표체량급항원성체도최고,표체산물피강해,구유량호적항원특이성.유도후gp 120장편단다태미피GS 115소표체.결론 재파사덕필적효모중성공표체gp 120분자장편단수요우화gp 120기인,위제비HIV-1적진단항원화기인공정중조역묘타하기출.
