中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2010年
9期
983-989
,共7页
胡硕%熊玲静%余剑英%雷萌%赵敏%张永学
鬍碩%熊玲靜%餘劍英%雷萌%趙敏%張永學
호석%웅령정%여검영%뢰맹%조민%장영학
35 型腺病毒%骨髓间充质干细胞%转染%CD46%柯萨奇腺病毒受体
35 型腺病毒%骨髓間充質榦細胞%轉染%CD46%柯薩奇腺病毒受體
35 형선병독%골수간충질간세포%전염%CD46%가살기선병독수체
目的:比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白(eGFP)转染人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs, rBMSCs)的效率.方法:分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs,成骨、成脂诱导培养以鉴定BMSCs.构建含eGFP的AdF35重组腺病毒载体AdF35-eGFP,以不同感染复数(multiplicity of infection, MOI)分别转染BMSCs后,MTT检测AdF35-eGFP对2种BMSCs的毒性作用,荧光显微镜观察eGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率,实时定量PCR检测2种BMSCs表达柯萨奇腺病毒受体(CAR)和CD46 mRNA的水平.结果:hBMSCs和rBMSCs从骨髓中分离出来后,分别成功诱导分化成骨和成脂.当MOI为1 000 PFU/mL时,AdF35-EGFP对2种BMSCs的活性均有明显抑制作用(P<0.001).AdF35-eGFP感染hBMSCs 48 h后,荧光显微镜下可见发强烈绿色荧光的细胞,流式细胞仪检测其转染效率可达(84.8±7.1)%;Ad5-eGFP感染rBMSCs后,荧光显微镜下仅见少量发绿色荧光的细胞,48 h转染效率为(3.1±1.1)%.hBMSCs高表达CD46 mRNA,低表达CAR mRNA;而rBMSCs则高表达CAR mRNA,低表达CD46 mRNA,2种基因的表达差异有统计学意义(P<0.01).结论:AdF35可作为理想载体携带目的基因转染hBMSCs,但不适合作为转染rBMSCs的载体.
目的:比較改良腺病毒AdF35-增彊綠熒光蛋白(eGFP)轉染人骨髓間充質榦細胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)和大鼠骨髓間充質榦細胞(rat BMSCs, rBMSCs)的效率.方法:分彆從人體、大鼠骨髓中分離齣BMSCs,成骨、成脂誘導培養以鑒定BMSCs.構建含eGFP的AdF35重組腺病毒載體AdF35-eGFP,以不同感染複數(multiplicity of infection, MOI)分彆轉染BMSCs後,MTT檢測AdF35-eGFP對2種BMSCs的毒性作用,熒光顯微鏡觀察eGFP的錶達,流式細胞儀檢測轉染效率,實時定量PCR檢測2種BMSCs錶達柯薩奇腺病毒受體(CAR)和CD46 mRNA的水平.結果:hBMSCs和rBMSCs從骨髓中分離齣來後,分彆成功誘導分化成骨和成脂.噹MOI為1 000 PFU/mL時,AdF35-EGFP對2種BMSCs的活性均有明顯抑製作用(P<0.001).AdF35-eGFP感染hBMSCs 48 h後,熒光顯微鏡下可見髮彊烈綠色熒光的細胞,流式細胞儀檢測其轉染效率可達(84.8±7.1)%;Ad5-eGFP感染rBMSCs後,熒光顯微鏡下僅見少量髮綠色熒光的細胞,48 h轉染效率為(3.1±1.1)%.hBMSCs高錶達CD46 mRNA,低錶達CAR mRNA;而rBMSCs則高錶達CAR mRNA,低錶達CD46 mRNA,2種基因的錶達差異有統計學意義(P<0.01).結論:AdF35可作為理想載體攜帶目的基因轉染hBMSCs,但不適閤作為轉染rBMSCs的載體.
목적:비교개량선병독AdF35-증강록형광단백(eGFP)전염인골수간충질간세포(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)화대서골수간충질간세포(rat BMSCs, rBMSCs)적효솔.방법:분별종인체、대서골수중분리출BMSCs,성골、성지유도배양이감정BMSCs.구건함eGFP적AdF35중조선병독재체AdF35-eGFP,이불동감염복수(multiplicity of infection, MOI)분별전염BMSCs후,MTT검측AdF35-eGFP대2충BMSCs적독성작용,형광현미경관찰eGFP적표체,류식세포의검측전염효솔,실시정량PCR검측2충BMSCs표체가살기선병독수체(CAR)화CD46 mRNA적수평.결과:hBMSCs화rBMSCs종골수중분리출래후,분별성공유도분화성골화성지.당MOI위1 000 PFU/mL시,AdF35-EGFP대2충BMSCs적활성균유명현억제작용(P<0.001).AdF35-eGFP감염hBMSCs 48 h후,형광현미경하가견발강렬록색형광적세포,류식세포의검측기전염효솔가체(84.8±7.1)%;Ad5-eGFP감염rBMSCs후,형광현미경하부견소량발록색형광적세포,48 h전염효솔위(3.1±1.1)%.hBMSCs고표체CD46 mRNA,저표체CAR mRNA;이rBMSCs칙고표체CAR mRNA,저표체CD46 mRNA,2충기인적표체차이유통계학의의(P<0.01).결론:AdF35가작위이상재체휴대목적기인전염hBMSCs,단불괄합작위전염rBMSCs적재체.
