医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
2期
95-99
,共5页
冯雪梅%尹莹%李安意%朱珍妮%陶元清%王忠东%陆蒙吉%杨东亮%王宝菊
馮雪梅%尹瑩%李安意%硃珍妮%陶元清%王忠東%陸矇吉%楊東亮%王寶菊
풍설매%윤형%리안의%주진니%도원청%왕충동%륙몽길%양동량%왕보국
乙型肝炎病毒%喜马拉雅旱獭%肌动蛋白%序列分析
乙型肝炎病毒%喜馬拉雅旱獺%肌動蛋白%序列分析
을형간염병독%희마랍아한달%기동단백%서렬분석
目的 喜马拉雅旱獭对土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)高度易感,可作为HBV感染的新动物模型.本研究对喜马拉雅旱獭β肌动蛋白(β-actin)的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为喜马拉雅旱獭在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的土拨鼠β-actin cDNA的序列设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭β-actin cDNA序列;PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-mhActin.对重组质粒进行PCR初筛及酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对所获得的序列进行同源性和种系进化分析.结果 获得的旱獭β-actin序列为349 bp(nt887～1 235),其中编码序列为323 bp(nt-887～1209),编码106个氨基酸,包含形成二硫键的2个丝氨酸位点(氨基酸16和氨基酸105)及与β-actin功能相关的2个ATP结合位点、6个凝溶胶蛋白结合位点和6个profilin结合位点.同源性分析发现上述序列与其它哺乳动物β-actin的同源性均高达88 %以上,与土拨鼠β-actin的同源性最高(99.69 %),其氨基酸序列的同源性为100 %.种系进化树分析提示喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的亲缘关系最近,其次为其它啮齿类动物.结论 成功克隆了喜马拉雅旱獭β-actin的部分序列.序列分析发现喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的同源性最高.
目的 喜馬拉雅旱獺對土撥鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)高度易感,可作為HBV感染的新動物模型.本研究對喜馬拉雅旱獺β肌動蛋白(β-actin)的部分cDNA序列進行瞭剋隆和序列分析,為喜馬拉雅旱獺在HBV感染研究中的應用奠定基礎.方法 根據Genbank的土撥鼠β-actin cDNA的序列設計特異性引物,提取旱獺脾組織總RNA作為模闆,RT-PCR擴增旱獺β-actin cDNA序列;PCR產物純化後連接至T載體(pMD18-T),構建重組質粒pMD18-T-mhActin.對重組質粒進行PCR初篩及酶切鑒定,選擇暘性剋隆測序;對所穫得的序列進行同源性和種繫進化分析.結果 穫得的旱獺β-actin序列為349 bp(nt887～1 235),其中編碼序列為323 bp(nt-887～1209),編碼106箇氨基痠,包含形成二硫鍵的2箇絲氨痠位點(氨基痠16和氨基痠105)及與β-actin功能相關的2箇ATP結閤位點、6箇凝溶膠蛋白結閤位點和6箇profilin結閤位點.同源性分析髮現上述序列與其它哺乳動物β-actin的同源性均高達88 %以上,與土撥鼠β-actin的同源性最高(99.69 %),其氨基痠序列的同源性為100 %.種繫進化樹分析提示喜馬拉雅旱獺β-actin與土撥鼠β-actin的親緣關繫最近,其次為其它齧齒類動物.結論 成功剋隆瞭喜馬拉雅旱獺β-actin的部分序列.序列分析髮現喜馬拉雅旱獺β-actin與土撥鼠β-actin的同源性最高.
목적 희마랍아한달대토발서간염병독(woodchuck hepatitis virus,WHV)고도역감,가작위HBV감염적신동물모형.본연구대희마랍아한달β기동단백(β-actin)적부분cDNA서렬진행료극륭화서렬분석,위희마랍아한달재HBV감염연구중적응용전정기출.방법 근거Genbank적토발서β-actin cDNA적서렬설계특이성인물,제취한달비조직총RNA작위모판,RT-PCR확증한달β-actin cDNA서렬;PCR산물순화후련접지T재체(pMD18-T),구건중조질립pMD18-T-mhActin.대중조질립진행PCR초사급매절감정,선택양성극륭측서;대소획득적서렬진행동원성화충계진화분석.결과 획득적한달β-actin서렬위349 bp(nt887～1 235),기중편마서렬위323 bp(nt-887～1209),편마106개안기산,포함형성이류건적2개사안산위점(안기산16화안기산105)급여β-actin공능상관적2개ATP결합위점、6개응용효단백결합위점화6개profilin결합위점.동원성분석발현상술서렬여기타포유동물β-actin적동원성균고체88 %이상,여토발서β-actin적동원성최고(99.69 %),기안기산서렬적동원성위100 %.충계진화수분석제시희마랍아한달β-actin여토발서β-actin적친연관계최근,기차위기타교치류동물.결론 성공극륭료희마랍아한달β-actin적부분서렬.서렬분석발현희마랍아한달β-actin여토발서β-actin적동원성최고.
