中国循证儿科杂志
中國循證兒科雜誌
중국순증인과잡지
CHINESE JOURNAL OF EVIDENCE-BASED PEDIATRICS
2011年
5期
368-375
,共8页
余章斌%韩树萍%朱春%邱玉芳%陈玉林%董小玥%郭锡熔
餘章斌%韓樹萍%硃春%邱玉芳%陳玉林%董小玥%郭錫鎔
여장빈%한수평%주춘%구옥방%진옥림%동소모%곽석용
室间隔缺损%胎儿%微小RNAs%差异表达
室間隔缺損%胎兒%微小RNAs%差異錶達
실간격결손%태인%미소RNAs%차이표체
目的 采用微小RNAs(miRNAs)表达谱芯片分析不同孕龄(孕早期与孕中期)室间隔缺损(VSD)胎儿心室肌组织中时序性表达差异的miRNAs.方法 连续性纳入2009年7～12月南京医科大学附属南京妇幼保健院因病理因素流产经解剖证实为VSD且不合并其他畸形的胎儿为VSD组.以同期因生理性难免流产,并经解剖证实无心脏畸形和其他器官畸形的胎儿为对照组,依据孕龄与VSD组1:1匹配.根据孕龄,将VSD组和对照组分别分为孕早期亚组和孕中期亚组.采用Agilent Human 2.0 miRNAs表达谱芯片观察胎儿心室肌组织miRNAs表达变化,芯片数据采用生物信息学方法进行分析,包括差异miRNAs筛选,预测miRNAs靶基因Gene Ontology分析,靶基因信号通路分析,并采用实时PCR法验证芯片结果.结果 VSD组和对照组各纳入6例,两组孕早期亚组和孕中期亚组均各3例.①通过差异miRNAs筛选,发现孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组间有33个时序性表达差异的miRNAs.19个miRNAs在孕早期VSD亚组表达上调,在孕中期VSD亚组表达下调;14个miRNAs在孕早期VSD亚组表达下调,在孕中期VSD亚组表达上调.②生物信息学预测到2 761个靶基因,大部分miRNAs的靶基因中含有与心脏发育直接相关的关键基因(TBX5、GATA4、TBX1和NKX2-5等).③靶基因Gene Ontology分析表明其中与细胞进程、代谢过程和生物调控相关的靶基因分别占整个靶基因数量的23.5%、18.3%和17.7%.④靶基因信号通路分析发现,WNT信号通路中的靶基因在孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组中存在时序性差异.⑤随机挑选孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组时序性表达差异的4个miRNAs(hsa-miR-19a、hsa-let-7e、hsa-miR-134和hsa-miR-206)进行验证,定量PCR结果显示,孕早期VSD亚组分别上调3.2(hsa-miR-19a)和4.1倍(hsa-let-7e),下调5.3(hsa-miR-134)和4.4倍(hsa-miR-206);孕中期VSD亚组分别下调4.8(hsa-miR-19a)和3.4倍(hsa-let-7e),上调4.5(hsa-miR-134)和3.9倍(hsa-miR-206).结论 时序性表达差异的miRNAs在胎儿VSD畸形的发生中可能起着重要作用,但本研究样本量较小,需要进一步扩大样本量进行验证.这些差异表达miRNAs的预测靶基因与细胞发育、分化和代谢密切相关,含有与心脏发育直接相关的关键基因,部分靶基因为WNT信号通路中的关键因子,提示VSD的发生发展是机体在miRNAs的参与下,在多个层面上使基因表达失控的共同结果.
目的 採用微小RNAs(miRNAs)錶達譜芯片分析不同孕齡(孕早期與孕中期)室間隔缺損(VSD)胎兒心室肌組織中時序性錶達差異的miRNAs.方法 連續性納入2009年7～12月南京醫科大學附屬南京婦幼保健院因病理因素流產經解剖證實為VSD且不閤併其他畸形的胎兒為VSD組.以同期因生理性難免流產,併經解剖證實無心髒畸形和其他器官畸形的胎兒為對照組,依據孕齡與VSD組1:1匹配.根據孕齡,將VSD組和對照組分彆分為孕早期亞組和孕中期亞組.採用Agilent Human 2.0 miRNAs錶達譜芯片觀察胎兒心室肌組織miRNAs錶達變化,芯片數據採用生物信息學方法進行分析,包括差異miRNAs篩選,預測miRNAs靶基因Gene Ontology分析,靶基因信號通路分析,併採用實時PCR法驗證芯片結果.結果 VSD組和對照組各納入6例,兩組孕早期亞組和孕中期亞組均各3例.①通過差異miRNAs篩選,髮現孕早期VSD亞組與孕中期VSD亞組間有33箇時序性錶達差異的miRNAs.19箇miRNAs在孕早期VSD亞組錶達上調,在孕中期VSD亞組錶達下調;14箇miRNAs在孕早期VSD亞組錶達下調,在孕中期VSD亞組錶達上調.②生物信息學預測到2 761箇靶基因,大部分miRNAs的靶基因中含有與心髒髮育直接相關的關鍵基因(TBX5、GATA4、TBX1和NKX2-5等).③靶基因Gene Ontology分析錶明其中與細胞進程、代謝過程和生物調控相關的靶基因分彆佔整箇靶基因數量的23.5%、18.3%和17.7%.④靶基因信號通路分析髮現,WNT信號通路中的靶基因在孕早期VSD亞組與孕中期VSD亞組中存在時序性差異.⑤隨機挑選孕早期VSD亞組與孕中期VSD亞組時序性錶達差異的4箇miRNAs(hsa-miR-19a、hsa-let-7e、hsa-miR-134和hsa-miR-206)進行驗證,定量PCR結果顯示,孕早期VSD亞組分彆上調3.2(hsa-miR-19a)和4.1倍(hsa-let-7e),下調5.3(hsa-miR-134)和4.4倍(hsa-miR-206);孕中期VSD亞組分彆下調4.8(hsa-miR-19a)和3.4倍(hsa-let-7e),上調4.5(hsa-miR-134)和3.9倍(hsa-miR-206).結論 時序性錶達差異的miRNAs在胎兒VSD畸形的髮生中可能起著重要作用,但本研究樣本量較小,需要進一步擴大樣本量進行驗證.這些差異錶達miRNAs的預測靶基因與細胞髮育、分化和代謝密切相關,含有與心髒髮育直接相關的關鍵基因,部分靶基因為WNT信號通路中的關鍵因子,提示VSD的髮生髮展是機體在miRNAs的參與下,在多箇層麵上使基因錶達失控的共同結果.
목적 채용미소RNAs(miRNAs)표체보심편분석불동잉령(잉조기여잉중기)실간격결손(VSD)태인심실기조직중시서성표체차이적miRNAs.방법 련속성납입2009년7～12월남경의과대학부속남경부유보건원인병리인소유산경해부증실위VSD차불합병기타기형적태인위VSD조.이동기인생이성난면유산,병경해부증실무심장기형화기타기관기형적태인위대조조,의거잉령여VSD조1:1필배.근거잉령,장VSD조화대조조분별분위잉조기아조화잉중기아조.채용Agilent Human 2.0 miRNAs표체보심편관찰태인심실기조직miRNAs표체변화,심편수거채용생물신식학방법진행분석,포괄차이miRNAs사선,예측miRNAs파기인Gene Ontology분석,파기인신호통로분석,병채용실시PCR법험증심편결과.결과 VSD조화대조조각납입6례,량조잉조기아조화잉중기아조균각3례.①통과차이miRNAs사선,발현잉조기VSD아조여잉중기VSD아조간유33개시서성표체차이적miRNAs.19개miRNAs재잉조기VSD아조표체상조,재잉중기VSD아조표체하조;14개miRNAs재잉조기VSD아조표체하조,재잉중기VSD아조표체상조.②생물신식학예측도2 761개파기인,대부분miRNAs적파기인중함유여심장발육직접상관적관건기인(TBX5、GATA4、TBX1화NKX2-5등).③파기인Gene Ontology분석표명기중여세포진정、대사과정화생물조공상관적파기인분별점정개파기인수량적23.5%、18.3%화17.7%.④파기인신호통로분석발현,WNT신호통로중적파기인재잉조기VSD아조여잉중기VSD아조중존재시서성차이.⑤수궤도선잉조기VSD아조여잉중기VSD아조시서성표체차이적4개miRNAs(hsa-miR-19a、hsa-let-7e、hsa-miR-134화hsa-miR-206)진행험증,정량PCR결과현시,잉조기VSD아조분별상조3.2(hsa-miR-19a)화4.1배(hsa-let-7e),하조5.3(hsa-miR-134)화4.4배(hsa-miR-206);잉중기VSD아조분별하조4.8(hsa-miR-19a)화3.4배(hsa-let-7e),상조4.5(hsa-miR-134)화3.9배(hsa-miR-206).결론 시서성표체차이적miRNAs재태인VSD기형적발생중가능기착중요작용,단본연구양본량교소,수요진일보확대양본량진행험증.저사차이표체miRNAs적예측파기인여세포발육、분화화대사밀절상관,함유여심장발육직접상관적관건기인,부분파기인위WNT신호통로중적관건인자,제시VSD적발생발전시궤체재miRNAs적삼여하,재다개층면상사기인표체실공적공동결과.
