华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
4期
455-460
,共6页
申建梅%胡黎明%宾淑英%廖泓之%林进添
申建梅%鬍黎明%賓淑英%廖泓之%林進添
신건매%호려명%빈숙영%료홍지%림진첨
瓜实蝇%气味结合蛋白%基因克隆%组织表达特征%原核表达
瓜實蠅%氣味結閤蛋白%基因剋隆%組織錶達特徵%原覈錶達
과실승%기미결합단백%기인극륭%조직표체특정%원핵표체
利用RT-PCR和RACE方法克隆获得瓜实蝇Bactrocera cucurbitae (Coquillett)普通气味结合蛋白(general odorant binding protein,GOBP)基因的cDNA全长序列,命名为BcucOBP.测序结果表明,BcucOBP开放阅读框全长447 bp,编码149个氨基酸.氨基酸序列比对及三维结构同源建模表明,此序列具有OBPs的典型特征,序列中具有6个保守的半胱氨酸和6个a螺旋区域.构建了重组表达载体pET28a(+)-BcucOBP,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中.SDS-PAGE及Western blotting分析表明,在IPTG进行诱导下目标蛋白以His-标签融合蛋白的形式在宿主菌中得到稳定表达.荧光定量PCR分析表明,BcucOBP mRNA在除雌虫腹节外的各个组织中都有表达,但在触角中的表达量最高.另外,BcucOBP mRNA在昆虫前足和生殖节中具有明显的性别差异表达特征,推测其不仅具有普通气味蛋白的功能,还可能参与了信息素的运输过程,在瓜实蝇交配行为中发挥重要作用.
利用RT-PCR和RACE方法剋隆穫得瓜實蠅Bactrocera cucurbitae (Coquillett)普通氣味結閤蛋白(general odorant binding protein,GOBP)基因的cDNA全長序列,命名為BcucOBP.測序結果錶明,BcucOBP開放閱讀框全長447 bp,編碼149箇氨基痠.氨基痠序列比對及三維結構同源建模錶明,此序列具有OBPs的典型特徵,序列中具有6箇保守的半胱氨痠和6箇a螺鏇區域.構建瞭重組錶達載體pET28a(+)-BcucOBP,併轉化大腸桿菌BL21(DE3)中.SDS-PAGE及Western blotting分析錶明,在IPTG進行誘導下目標蛋白以His-標籤融閤蛋白的形式在宿主菌中得到穩定錶達.熒光定量PCR分析錶明,BcucOBP mRNA在除雌蟲腹節外的各箇組織中都有錶達,但在觸角中的錶達量最高.另外,BcucOBP mRNA在昆蟲前足和生殖節中具有明顯的性彆差異錶達特徵,推測其不僅具有普通氣味蛋白的功能,還可能參與瞭信息素的運輸過程,在瓜實蠅交配行為中髮揮重要作用.
이용RT-PCR화RACE방법극륭획득과실승Bactrocera cucurbitae (Coquillett)보통기미결합단백(general odorant binding protein,GOBP)기인적cDNA전장서렬,명명위BcucOBP.측서결과표명,BcucOBP개방열독광전장447 bp,편마149개안기산.안기산서렬비대급삼유결구동원건모표명,차서렬구유OBPs적전형특정,서렬중구유6개보수적반광안산화6개a라선구역.구건료중조표체재체pET28a(+)-BcucOBP,병전화대장간균BL21(DE3)중.SDS-PAGE급Western blotting분석표명,재IPTG진행유도하목표단백이His-표첨융합단백적형식재숙주균중득도은정표체.형광정량PCR분석표명,BcucOBP mRNA재제자충복절외적각개조직중도유표체,단재촉각중적표체량최고.령외,BcucOBP mRNA재곤충전족화생식절중구유명현적성별차이표체특정,추측기불부구유보통기미단백적공능,환가능삼여료신식소적운수과정,재과실승교배행위중발휘중요작용.
