猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立
저온병독야독주화토화약독역묘주RT-PCR-RFLP감별검측방법적건립
Development of RT-PCR-RFLP for Detection and Differentiation of Wild-type and Vaccine Viruses of Classical Swine Fever Virus
  • 万方数据
    畜牧兽医学报 축목수의학보

    2012年 6期 943-949 ,共7页

    胡继明%杨培培%王颖%孙海芳%黄娟%陈俏俏%杨瑞梅%张传美%秦晓冰%单虎

    호계명%양배배%왕영%손해방%황연%진초초%양서매%장전미%진효빙%단호

    猪瘟病毒%野毒株%兔化弱毒疫苗株%RT-PCR-RFLP 豬瘟病毒%野毒株%兔化弱毒疫苗株%RT-PCR-RFLP
    저온병독%야독주%토화약독역묘주%RT-PCR-RFLP
    本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法.根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法；对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法.结果RT-PCR扩增片段为825 bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322 bp和503 bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6 μg,mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被Apa Ⅰ酶切；8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群.建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段.
    본연구지재건립저온병독야독주화토화약독역묘주RT-PCR-RFLP감별검측방법.근거Shimen주설계1대특이성인물,건립저온병독RT-PCR-RFLP검측방법；대20빈의사저온림상양품진행검측,병대검출적산동8주류행야독주화2주역묘주PCR산물진행극륭여서렬분석,험증상술방법.결과RT-PCR확증편단위825 bp,산물경RFLP분석,야독주적PCR산물능피ApaⅠ매절위322 bp화503 bp 2개편단,토화약독역묘주칙불능피매절,검측출RNA적최저농도위0.028 6 μg,mL-1;8주류행야독주도함GGGCCC서렬(ApaⅠ매절위점),2주역묘주상응서렬위GAGCCC,불능피Apa Ⅰ매절；8주류행야독주속우기인2군,2주역묘주여HCLV유전관계근,위기인1군.건립료가감별저온병독야독주화토화약독역묘주RT-PCR-RFLP검측방법,위저온적방공제공유효수단.
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