重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2007年
8期
822-825,834
,共5页
鼻咽肿瘤%绿色荧光蛋白%短发卡状RNA%RNA干扰
鼻嚥腫瘤%綠色熒光蛋白%短髮卡狀RNA%RNA榦擾
비인종류%록색형광단백%단발잡상RNA%RNA간우
目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的鼻咽癌细胞株;观察不同转染浓度的短发卡状RNA对鼻咽癌细胞内源性GFP的抑制效率及细胞毒性.方法:转染pEGFP-N1至鼻咽癌细胞株HNE1,G418筛选获得稳定表达GFP的HNE1-GFP细胞株;利用针对GFP基因的短发卡状RNA表达载体shGFP,以不同浓度shGFP转染HNE1-GFP,荧光显微镜观察细胞荧光强度,软件分析荧光抑制效率,MTT检测细胞毒性,RT-PCR检测GFPmRNA水平改变,Western Blot检测GFP蛋白水平改变.结果:绿色荧光稳定表达于传代HNE1细胞中;shGFP能够显著抑制该细胞中GFP的表达,抑制效率分别为49.7%,84.8%,86.7%且无细胞毒性;GFP在mRNA和蛋白水平的表达均有明显下降.结论:稳定表达GFP的鼻咽癌细胞株成功建立;RNA干扰载体可抑制鼻咽癌细胞中GFP的表达,其抑制效率有明显的浓度依赖性且无明显细胞毒性.该系统能够用于鼻咽肿瘤的RNA干扰机制研究中.
目的:建立穩定錶達綠色熒光蛋白(GFP)的鼻嚥癌細胞株;觀察不同轉染濃度的短髮卡狀RNA對鼻嚥癌細胞內源性GFP的抑製效率及細胞毒性.方法:轉染pEGFP-N1至鼻嚥癌細胞株HNE1,G418篩選穫得穩定錶達GFP的HNE1-GFP細胞株;利用針對GFP基因的短髮卡狀RNA錶達載體shGFP,以不同濃度shGFP轉染HNE1-GFP,熒光顯微鏡觀察細胞熒光彊度,軟件分析熒光抑製效率,MTT檢測細胞毒性,RT-PCR檢測GFPmRNA水平改變,Western Blot檢測GFP蛋白水平改變.結果:綠色熒光穩定錶達于傳代HNE1細胞中;shGFP能夠顯著抑製該細胞中GFP的錶達,抑製效率分彆為49.7%,84.8%,86.7%且無細胞毒性;GFP在mRNA和蛋白水平的錶達均有明顯下降.結論:穩定錶達GFP的鼻嚥癌細胞株成功建立;RNA榦擾載體可抑製鼻嚥癌細胞中GFP的錶達,其抑製效率有明顯的濃度依賴性且無明顯細胞毒性.該繫統能夠用于鼻嚥腫瘤的RNA榦擾機製研究中.
목적:건립은정표체록색형광단백(GFP)적비인암세포주;관찰불동전염농도적단발잡상RNA대비인암세포내원성GFP적억제효솔급세포독성.방법:전염pEGFP-N1지비인암세포주HNE1,G418사선획득은정표체GFP적HNE1-GFP세포주;이용침대GFP기인적단발잡상RNA표체재체shGFP,이불동농도shGFP전염HNE1-GFP,형광현미경관찰세포형광강도,연건분석형광억제효솔,MTT검측세포독성,RT-PCR검측GFPmRNA수평개변,Western Blot검측GFP단백수평개변.결과:록색형광은정표체우전대HNE1세포중;shGFP능구현저억제해세포중GFP적표체,억제효솔분별위49.7%,84.8%,86.7%차무세포독성;GFP재mRNA화단백수평적표체균유명현하강.결론:은정표체GFP적비인암세포주성공건립;RNA간우재체가억제비인암세포중GFP적표체,기억제효솔유명현적농도의뢰성차무명현세포독성.해계통능구용우비인종류적RNA간우궤제연구중.
