眼科新进展
眼科新進展
안과신진전
RECENT ADVANCES IN OPHTHALMOLOGY
2008年
3期
186-189
,共4页
侯勇生%邢琳%傅少颖%吕冰洁%刘洪玲%崔浩
侯勇生%邢琳%傅少穎%呂冰潔%劉洪玲%崔浩
후용생%형림%부소영%려빙길%류홍령%최호
可诱导共刺激因子%RNA干扰%实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎%转染%鼠
可誘導共刺激因子%RNA榦擾%實驗性自身免疫性葡萄膜視網膜炎%轉染%鼠
가유도공자격인자%RNA간우%실험성자신면역성포도막시망막염%전염%서
目的 观察可诱导共刺激因子(inducible co-stimulator factor,ICOS)短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对大鼠活化T细胞中ICOS基因的沉默效应,筛选有效干扰靶点.方法 设计合成ICOS RNA寡核苷酸片段,经退火、连接等步骤克隆至线性化的pRNAT-U6.1/Neo真核表达载体上,测序鉴定.应用Lipofectamine 2000将该质粒转染活化的大鼠T细胞,荧光定量RT-PCR检测ICOS mRNA表达情况,Western blot检测ICOS蛋白表达情况.结果 成功构建了3个靶点的重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA 1、2、3,荧光定量RT-PCR和Western blot显示转染这3种重组质粒的T细胞ICOS mRNA和蛋白表达均较对照组有不同程度的下降,其中1号靶点的干扰效应最为明显.在转染后的T细胞中,其抑制率分别达到了51.3%、78.3%.结论 重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA能有效抑制大鼠活化T细胞中ICOS基因的表达,并筛选出了有效干扰靶位.RNA干扰技术有望成为研究ICOS在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中作用的有效手段.
目的 觀察可誘導共刺激因子(inducible co-stimulator factor,ICOS)短髮夾狀RNA(short hairpin RNA,shRNA)對大鼠活化T細胞中ICOS基因的沉默效應,篩選有效榦擾靶點.方法 設計閤成ICOS RNA寡覈苷痠片段,經退火、連接等步驟剋隆至線性化的pRNAT-U6.1/Neo真覈錶達載體上,測序鑒定.應用Lipofectamine 2000將該質粒轉染活化的大鼠T細胞,熒光定量RT-PCR檢測ICOS mRNA錶達情況,Western blot檢測ICOS蛋白錶達情況.結果 成功構建瞭3箇靶點的重組質粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA 1、2、3,熒光定量RT-PCR和Western blot顯示轉染這3種重組質粒的T細胞ICOS mRNA和蛋白錶達均較對照組有不同程度的下降,其中1號靶點的榦擾效應最為明顯.在轉染後的T細胞中,其抑製率分彆達到瞭51.3%、78.3%.結論 重組質粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA能有效抑製大鼠活化T細胞中ICOS基因的錶達,併篩選齣瞭有效榦擾靶位.RNA榦擾技術有望成為研究ICOS在實驗性自身免疫性葡萄膜視網膜炎中作用的有效手段.
목적 관찰가유도공자격인자(inducible co-stimulator factor,ICOS)단발협상RNA(short hairpin RNA,shRNA)대대서활화T세포중ICOS기인적침묵효응,사선유효간우파점.방법 설계합성ICOS RNA과핵감산편단,경퇴화、련접등보취극륭지선성화적pRNAT-U6.1/Neo진핵표체재체상,측서감정.응용Lipofectamine 2000장해질립전염활화적대서T세포,형광정량RT-PCR검측ICOS mRNA표체정황,Western blot검측ICOS단백표체정황.결과 성공구건료3개파점적중조질립pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA 1、2、3,형광정량RT-PCR화Western blot현시전염저3충중조질립적T세포ICOS mRNA화단백표체균교대조조유불동정도적하강,기중1호파점적간우효응최위명현.재전염후적T세포중,기억제솔분별체도료51.3%、78.3%.결론 중조질립pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA능유효억제대서활화T세포중ICOS기인적표체,병사선출료유효간우파위.RNA간우기술유망성위연구ICOS재실험성자신면역성포도막시망막염중작용적유효수단.
