CAJ | 학술논문

目的:建立流式细胞术检测单核巨噬细胞吞噬荧光素标记结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的方法.方法:用不同浓度荧光素(FITC)标记Mtb,流式细胞术检测FITC对 Mtb的标记率.健康人外周全血与FITC标记Mtb(FITC-Mtb) 于37 ℃共孵育10～120 min,溶解红细胞,洗涤后加台盼蓝淬灭未吞噬的FITC-Mtb的荧光,流式细胞术检测FITC阳性单核细胞的数值,计算单核细胞对Mtb的吞噬率.FITC-Mtb与佛波醇酯(PMA)激活分化的THP-1细胞以10 ∶ 1的比例共孵育1～6 h,或以1∶ 1～100 ∶ 1的比例孵育1 h和2 h,用同样的方法检测吞噬率.结果:FITC(50 μg/ml)与Mtb作用2 h的标记率达92%.人单核细胞对FITC-Mtb的吞噬率从10 min的34.68%增加至120 min的79.90%.THP-1细胞对FITC-Mtb的吞噬率从1 h的30%增加至6 h的81%.FITC-Mtb与THP-1细胞以100∶ 1比例孵育1 h,吞噬率达平台(81%);以50∶ 1的比例孵育2 h,吞噬率达平台(82%).未加台盼蓝淬灭时,单核细胞在10 min和120 min对FITC-Mtb的吞噬率与加台盼蓝淬灭相比,分别增加29%和6%;而未加台盼蓝淬灭时,THP-1细胞在1 h和6 h对FITC-Mtb的吞噬率与加台盼蓝淬灭相比分别增加1%和7%.结论:流式细胞术检测人单核巨噬细胞吞噬FITC标记Mtb是测定单核巨噬细胞对Mtb吞噬活性的简便、快速和重复性好的方法.
목적:건립류식세포술검측단핵거서세포탄서형광소표기결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)적방법.방법:용불동농도형광소(FITC)표기Mtb,류식세포술검측FITC대 Mtb적표기솔.건강인외주전혈여FITC표기Mtb(FITC-Mtb) 우37 ℃공부육10～120 min,용해홍세포,세조후가태반람쉬멸미탄서적FITC-Mtb적형광,류식세포술검측FITC양성단핵세포적수치,계산단핵세포대Mtb적탄서솔.FITC-Mtb여불파순지(PMA)격활분화적THP-1세포이10 ∶ 1적비례공부육1～6 h,혹이1∶ 1～100 ∶ 1적비례부육1 h화2 h,용동양적방법검측탄서솔.결과:FITC(50 μg/ml)여Mtb작용2 h적표기솔체92%.인단핵세포대FITC-Mtb적탄서솔종10 min적34.68%증가지120 min적79.90%.THP-1세포대FITC-Mtb적탄서솔종1 h적30%증가지6 h적81%.FITC-Mtb여THP-1세포이100∶ 1비례부육1 h,탄서솔체평태(81%);이50∶ 1적비례부육2 h,탄서솔체평태(82%).미가태반람쉬멸시,단핵세포재10 min화120 min대FITC-Mtb적탄서솔여가태반람쉬멸상비,분별증가29%화6%;이미가태반람쉬멸시,THP-1세포재1 h화6 h대FITC-Mtb적탄서솔여가태반람쉬멸상비분별증가1%화7%.결론:류식세포술검측인단핵거서세포탄서FITC표기Mtb시측정단핵거서세포대Mtb탄서활성적간편、쾌속화중복성호적방법.