吉林农业大学学报
吉林農業大學學報
길임농업대학학보
JOURNAL OF JILIN AGRICUL TURAL UNIVERSITY
2010年
6期
644-649
,共6页
紫穗槐%农杆菌%茎段%愈伤组织%遗传转化
紫穗槐%農桿菌%莖段%愈傷組織%遺傳轉化
자수괴%농간균%경단%유상조직%유전전화
采用农杆菌介导法对紫穗槐茎段诱导的愈伤组织进行遗传转化研究.确定了卡那霉素临界耐受浓度为40 mg/L.菌液浓度与侵染时间的正交试验结果表明:侵染菌液OD600为0.8、侵染时间为30 min 时转化效率最高,达17.95 %.GUS染色检测分析表明:含pBI121-GUS质粒DNA农杆菌侵染转化的愈伤组织其抗性不定芽和再生植株根和叶均呈蓝色.转化植株叶PCR 检测结果表明外源GUS基因已整合到紫穗槐基因组中.以上结果表明建立了以茎段诱导愈伤组织为转化受体、农杆菌介导的紫穗槐高效遗传转化体系.为了验证其可重复性,又进行了pBI121-GFP基因的转化,T0代再生植株PCR 检测整合率达85%,在488 nm蓝光源激发下转化株的顶芽产生绿色荧光,说明转入的基因在35S启动子下过量表达.此遗传转化体系可应用于转基因育种.
採用農桿菌介導法對紫穗槐莖段誘導的愈傷組織進行遺傳轉化研究.確定瞭卡那黴素臨界耐受濃度為40 mg/L.菌液濃度與侵染時間的正交試驗結果錶明:侵染菌液OD600為0.8、侵染時間為30 min 時轉化效率最高,達17.95 %.GUS染色檢測分析錶明:含pBI121-GUS質粒DNA農桿菌侵染轉化的愈傷組織其抗性不定芽和再生植株根和葉均呈藍色.轉化植株葉PCR 檢測結果錶明外源GUS基因已整閤到紫穗槐基因組中.以上結果錶明建立瞭以莖段誘導愈傷組織為轉化受體、農桿菌介導的紫穗槐高效遺傳轉化體繫.為瞭驗證其可重複性,又進行瞭pBI121-GFP基因的轉化,T0代再生植株PCR 檢測整閤率達85%,在488 nm藍光源激髮下轉化株的頂芽產生綠色熒光,說明轉入的基因在35S啟動子下過量錶達.此遺傳轉化體繫可應用于轉基因育種.
채용농간균개도법대자수괴경단유도적유상조직진행유전전화연구.학정료잡나매소림계내수농도위40 mg/L.균액농도여침염시간적정교시험결과표명:침염균액OD600위0.8、침염시간위30 min 시전화효솔최고,체17.95 %.GUS염색검측분석표명:함pBI121-GUS질립DNA농간균침염전화적유상조직기항성불정아화재생식주근화협균정람색.전화식주협PCR 검측결과표명외원GUS기인이정합도자수괴기인조중.이상결과표명건립료이경단유도유상조직위전화수체、농간균개도적자수괴고효유전전화체계.위료험증기가중복성,우진행료pBI121-GFP기인적전화,T0대재생식주PCR 검측정합솔체85%,재488 nm람광원격발하전화주적정아산생록색형광,설명전입적기인재35S계동자하과량표체.차유전전화체계가응용우전기인육충.
