CAJ | 학술논문

背景:多药耐药一直是遏制提高结肠癌化疗有效性的瓶颈问题.目的:探讨沉默PPARα能否减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡,从而阐明PPARα在羟喜树碱耐药中的潜在作用.方法:构建针对PPARα基因的siRNA干扰载体,并转染人结肠癌SW1116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞,以RT-PCR和蛋白质印迹法验证干扰效果.经羟喜树碱干预后,以MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡.以定量RT-PCR检测不同浓度miR-506前体转染SW1116细胞后对PPARα下游调控靶基因mRNA表达的影响.结果:siRNA干扰载体Ⅲ的沉默效果最佳,PPARα mRNA和蛋白表达分别下调了约94.1%±3.4%和70.8%±8.6%.稳定转染siRNA的SW1116细胞的半数抑制浓度(IC50)为(332±19)μg/L,亲本SW1116细胞为(152±12)μg/L.在相同浓度羟喜树碱的作用下,亲本SW1116细胞的凋亡率显著高于稳定转染siRNA的SW1116细胞(150μg/L:7.0%±2.5%对2.8%±1.6%;300μg,L:32.4%±7.1%对18.5%±2.7%).miR-506前体下调HMGCS-2表达,上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达,其中上调CCND1的作用最为明显.结论:成功构建了,针对PPARα的siRNA干扰载体;沉默PPARα能增强SW1116细胞对羟喜树碱的抵抗性,可能与下调HMGCS-2表达并上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达有关.
배경:다약내약일직시알제제고결장암화료유효성적병경문제.목적:탐토침묵PPARα능부감약간희수감유도적인결장암세포조망,종이천명PPARα재간희수감내약중적잠재작용.방법:구건침대PPARα기인적siRNA간우재체,병전염인결장암SW1116세포,경G418사선출은정전염적세포,이RT-PCR화단백질인적법험증간우효과.경간희수감간예후,이MTT법검측세포증식,Annexin V-FITC/PI검측세포조망.이정량RT-PCR검측불동농도miR-506전체전염SW1116세포후대PPARα하유조공파기인mRNA표체적영향.결과:siRNA간우재체Ⅲ적침묵효과최가,PPARα mRNA화단백표체분별하조료약94.1%±3.4%화70.8%±8.6%.은정전염siRNA적SW1116세포적반수억제농도(IC50)위(332±19)μg/L,친본SW1116세포위(152±12)μg/L.재상동농도간희수감적작용하,친본SW1116세포적조망솔현저고우은정전염siRNA적SW1116세포(150μg/L:7.0%±2.5%대2.8%±1.6%;300μg,L:32.4%±7.1%대18.5%±2.7%).miR-506전체하조HMGCS-2표체,상조FABP-2、CCND1화TGF-β1표체,기중상조CCND1적작용최위명현.결론:성공구건료,침대PPARα적siRNA간우재체;침묵PPARα능증강SW1116세포대간희수감적저항성,가능여하조HMGCS-2표체병상조FABP-2、CCND1화TGF-β1표체유관.