CAJ | 학술논문

目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子.原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性.方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况.结果:用基因工程方法表达和纯化了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位.结论:表达了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性.
목적:SARA/SBD시섬유화형성과정중적부성조절인자.원핵표체、순화함반식격활단백(TAT)단백전도역(PTD)적TAT PTD-SARA/SBD융합단백,병감정기생물학활성.방법:장TAT PTD-SARA/SBD기인극륭입대His표첨적원핵표체재체pET-44a(+)중,전화대장간균BL21,IPTG유도표체,표체산물경Ni2+-NTA친화층석주순화후,SDS-PAGE화Western인적감정목적단백;용인복막간피세포계(HPMC),통과면역세포화학방법검측기천막능력,급여TGF-β1신호통로중Smad2인자적공정위정황.결과:용기인공정방법표체화순화료TAT PTD-SARA/SBD융합단백,목적단백약점균체총단백적20%좌우,차이가용형식표체,경Ni2+-NTA순화후,소획단백순도고우95%(HPLC귀일법);공능학실험결과현시해단백능천과포막,주요정위우포핵,차여Smad2인자구유핵내공정위.결론:표체료TAT PTD-SARA/SBD융합단백,해단백구유생물학활성.