山地农业生物学报
山地農業生物學報
산지농업생물학보
JOURNAL OF MOUNTAIN AGRICULTURE AND BIOLOGY
2012年
4期
297-300
,共4页
陈业%张玉晶%李娅迪%沈文华%江辉%关萍
陳業%張玉晶%李婭迪%瀋文華%江輝%關萍
진업%장옥정%리아적%침문화%강휘%관평
兜兰属%ISSR-PCR%正交设计%优化
兜蘭屬%ISSR-PCR%正交設計%優化
두란속%ISSR-PCR%정교설계%우화
以兜兰为试材,用改进的CTAB法提取总DNA,采用正交试验设计,分析Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和Taq DNA聚合酶用量对ISSR - PCR扩增的影响,并通过梯度PCR确定最佳退火温度,最终建立兜兰ISSR扩增反应体系.最佳反应体系为:25 μL体系中,含10×PCR buffer 2.5 μL、1.5 mmol/L Mg2+、0.15 mmol/L dNTP、0.6μmol/L引物、1.OUTaq酶和40 ng模板DNA.反应程序为:94℃5min,94℃30s,56.2℃45s,72℃1min,共40个循环；72℃延伸7min.
以兜蘭為試材,用改進的CTAB法提取總DNA,採用正交試驗設計,分析Mg2+濃度、dNTP濃度、引物濃度和Taq DNA聚閤酶用量對ISSR - PCR擴增的影響,併通過梯度PCR確定最佳退火溫度,最終建立兜蘭ISSR擴增反應體繫.最佳反應體繫為:25 μL體繫中,含10×PCR buffer 2.5 μL、1.5 mmol/L Mg2+、0.15 mmol/L dNTP、0.6μmol/L引物、1.OUTaq酶和40 ng模闆DNA.反應程序為:94℃5min,94℃30s,56.2℃45s,72℃1min,共40箇循環；72℃延伸7min.
이두란위시재,용개진적CTAB법제취총DNA,채용정교시험설계,분석Mg2+농도、dNTP농도、인물농도화Taq DNA취합매용량대ISSR - PCR확증적영향,병통과제도PCR학정최가퇴화온도,최종건립두란ISSR확증반응체계.최가반응체계위:25 μL체계중,함10×PCR buffer 2.5 μL、1.5 mmol/L Mg2+、0.15 mmol/L dNTP、0.6μmol/L인물、1.OUTaq매화40 ng모판DNA.반응정서위:94℃5min,94℃30s,56.2℃45s,72℃1min,공40개순배；72℃연신7min.
