贵州医药
貴州醫藥
귀주의약
GUIZHOU MEDICAL JOURNAL
2002年
9期
771-773
,共3页
肖芸%王季石%任志绢%方琴%孙等军%张维%张旭%吴镇宇
肖蕓%王季石%任誌絹%方琴%孫等軍%張維%張旭%吳鎮宇
초예%왕계석%임지견%방금%손등군%장유%장욱%오진우
六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶%G156A%体外定点诱导突变%逆转录病毒载体
六氧甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉移酶%G156A%體外定點誘導突變%逆轉錄病毒載體
륙양갑기조표령-DNA-갑기전이매%G156A%체외정점유도돌변%역전록병독재체
目的获得含突变位点G156A(第156位点的甘氨酸突变为丙氨酸)的六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase.MGMT),并构建含G156A MGMT(△MGMT)的逆转录病毒载体.方法通过体外定点诱导突变技术产生G156A突变的MGMT,将其克隆入pGEM-T载体,进一步亚克隆至G1Na逆转录病毒载体.结果通过DNA测序分析证实预期位点GGC(甘氨酸)突变为GCC(丙氨酸),经PCR及酶切分析证实成功构建了逆转录病毒载体G1Na△MGMT.结论通过体外定点诱导突变技术成功获得了G156A MGMT,并运用基因重组技术构建了逆转录病毒表达载体G1Na-△MGMT,为进一步将G156A MGMT转导造血干细胞对化疗药物抗性的研究奠定了基础.
目的穫得含突變位點G156A(第156位點的甘氨痠突變為丙氨痠)的六氧甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase.MGMT),併構建含G156A MGMT(△MGMT)的逆轉錄病毒載體.方法通過體外定點誘導突變技術產生G156A突變的MGMT,將其剋隆入pGEM-T載體,進一步亞剋隆至G1Na逆轉錄病毒載體.結果通過DNA測序分析證實預期位點GGC(甘氨痠)突變為GCC(丙氨痠),經PCR及酶切分析證實成功構建瞭逆轉錄病毒載體G1Na△MGMT.結論通過體外定點誘導突變技術成功穫得瞭G156A MGMT,併運用基因重組技術構建瞭逆轉錄病毒錶達載體G1Na-△MGMT,為進一步將G156A MGMT轉導造血榦細胞對化療藥物抗性的研究奠定瞭基礎.
목적획득함돌변위점G156A(제156위점적감안산돌변위병안산)적륙양갑기조표령-DNA-갑기전이매(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase.MGMT),병구건함G156A MGMT(△MGMT)적역전록병독재체.방법통과체외정점유도돌변기술산생G156A돌변적MGMT,장기극륭입pGEM-T재체,진일보아극륭지G1Na역전록병독재체.결과통과DNA측서분석증실예기위점GGC(감안산)돌변위GCC(병안산),경PCR급매절분석증실성공구건료역전록병독재체G1Na△MGMT.결론통과체외정점유도돌변기술성공획득료G156A MGMT,병운용기인중조기술구건료역전록병독표체재체G1Na-△MGMT,위진일보장G156A MGMT전도조혈간세포대화료약물항성적연구전정료기출.
