CAJ | 학술논문

背景与目的:足叶乙甙(etoposide,VP-16)为白血病化疗最常用的化疗药之一,其临床应用日益受到天然与继发耐药的影响.对一些实体瘤的研究发现顺铂(cisplatin,DDP)与VP-16联合应用具有协同效应.本研究通过DDP与VP-16联合作用杀伤白血病细胞K562,探讨其增强VP-16疗效的作用机制.方法:采用VP-16(0,5μg/ml)与不同浓度DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)联合对K562细胞进行处理.应用噻唑蓝(MTT)法检测用药后细胞的存活相对数量,计算VP-16和DDP应用对K562细胞的抑制作用;AO/EB双荧光法定量分析细胞凋亡率.半定量RT-PCR法和Western blot检测拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3基因的mRNA和蛋白水平.结果:VP-16与DDP合用具有明显的协同效应.两药合用后,细胞凋亡率明显增加.单独应用DDP可以明显上调TOPOⅡ和Sp1表达(呈浓度依赖,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在30μg/ml DDP时比正常对照分别上调36%,25%和75%),并使Sp3的表达降低49%;单用5 μg/ml VP-16时TOPOⅡ则下调(TOPOⅡα下降72%),TOPOⅡβ和Sp1的表达未受影响,Sp3的表达上调14%.5 μg/ml VP-16与DDP联合应用具有协同效应,使TOPOⅡ和Sp1表达水平升高.TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在5μg/ml VP-16与30μg/ml DDP联合应用时比单用VP-16分别上升83%,11%,58%,但低于单独应用DDP的表达水平;而Sp3的表达水平与单独应用DDP比较下调61.3%.Western印迹检测结果与RT-PCR结果相符.结论:DDP在化疗中与VP-16发挥协同作用,通过上调拓扑异构酶Ⅱ的表达水平,为VP-16提供更多的靶酶,使VP-16杀伤K562细胞效果明显提高.
배경여목적:족협을대(etoposide,VP-16)위백혈병화료최상용적화료약지일,기림상응용일익수도천연여계발내약적영향.대일사실체류적연구발현순박(cisplatin,DDP)여VP-16연합응용구유협동효응.본연구통과DDP여VP-16연합작용살상백혈병세포K562,탐토기증강VP-16료효적작용궤제.방법:채용VP-16(0,5μg/ml)여불동농도DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)연합대K562세포진행처리.응용새서람(MTT)법검측용약후세포적존활상대수량,계산VP-16화DDP응용대K562세포적억제작용;AO/EB쌍형광법정량분석세포조망솔.반정량RT-PCR법화Western blot검측탁복이구매(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3기인적mRNA화단백수평.결과:VP-16여DDP합용구유명현적협동효응.량약합용후,세포조망솔명현증가.단독응용DDP가이명현상조TOPOⅡ화Sp1표체(정농도의뢰,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1재30μg/ml DDP시비정상대조분별상조36%,25%화75%),병사Sp3적표체강저49%;단용5 μg/ml VP-16시TOPOⅡ칙하조(TOPOⅡα하강72%),TOPOⅡβ화Sp1적표체미수영향,Sp3적표체상조14%.5 μg/ml VP-16여DDP연합응용구유협동효응,사TOPOⅡ화Sp1표체수평승고.TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1재5μg/ml VP-16여30μg/ml DDP연합응용시비단용VP-16분별상승83%,11%,58%,단저우단독응용DDP적표체수평;이Sp3적표체수평여단독응용DDP비교하조61.3%.Western인적검측결과여RT-PCR결과상부.결론:DDP재화료중여VP-16발휘협동작용,통과상조탁복이구매Ⅱ적표체수평,위VP-16제공경다적파매,사VP-16살상K562세포효과명현제고.