CAJ | 학술논문

目的:纯化双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis Grube)蛋白酶,并对其性质进行研究.方法:将沙蚕匀浆液先后进行Superdex-75凝胶柱层析、MonoQTM阴离子交换柱层析及SP-Sepharose 4B阳离子交换层析进行纯化.将经过非还原性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的蛋白酶电转移至含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶中,通过观察明胶的分解来确定电泳条带的蛋白酶活性.对纯化后蛋白酶的最适pH值,热稳定性,最适温度,蛋白酶抑制剂的影响,有机溶剂的稳定性,金属离子对酶活性的影响等性质进行了测定.结果:纯化后得到的一种蛋白酶,还原性SDSPAGE显示纯化的蛋白酶为两条带,分子量分别为M,34 900和M,33 900,而非还原性SDSPAGE出现了分子量分别为Mr 65 600、Mr 57 900、Mr 43 500的三条蛋白带,明胶蛋白酶活性图谱检测显示酶活性主要在约Mr 66 000处.该蛋白酶具较好的热稳定性,在pH 8-10和20-35℃的情况下有较高活性.PMSF对该酶有较强抑制作用,而有机溶剂对该酶没有明显的影响.结论:该蛋白酶由两个通过二硫键连接在一起的亚基构成,两亚基的分子量分别为Mr33 900和Mr 34 900;本文所采用的新的明胶蛋白酶活性图谱检测法是一种非常灵敏和有效的蛋白酶活性检测方法.
목적:순화쌍치위사잠(Perinereis aibuhitensis Grube)단백매,병대기성질진행연구.방법:장사잠균장액선후진행Superdex-75응효주층석、MonoQTM음리자교환주층석급SP-Sepharose 4B양리자교환층석진행순화.장경과비환원성SDS-취병희선알응효전영적단백매전전이지함명효적SDS-취병희선알응효중,통과관찰명효적분해래학정전영조대적단백매활성.대순화후단백매적최괄pH치,열은정성,최괄온도,단백매억제제적영향,유궤용제적은정성,금속리자대매활성적영향등성질진행료측정.결과:순화후득도적일충단백매,환원성SDSPAGE현시순화적단백매위량조대,분자량분별위M,34 900화M,33 900,이비환원성SDSPAGE출현료분자량분별위Mr 65 600、Mr 57 900、Mr 43 500적삼조단백대,명효단백매활성도보검측현시매활성주요재약Mr 66 000처.해단백매구교호적열은정성,재pH 8-10화20-35℃적정황하유교고활성.PMSF대해매유교강억제작용,이유궤용제대해매몰유명현적영향.결론:해단백매유량개통과이류건련접재일기적아기구성,량아기적분자량분별위Mr33 900화Mr 34 900;본문소채용적신적명효단백매활성도보검측법시일충비상령민화유효적단백매활성검측방법.