胃肠病学
胃腸病學
위장병학
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY
2007年
6期
331-334
,共4页
钟长青%智发朝%王继德%龙靖华%张迎春
鐘長青%智髮朝%王繼德%龍靖華%張迎春
종장청%지발조%왕계덕%룡정화%장영춘
基因,NOD2/CARD15%诱变,定点%转染
基因,NOD2/CARD15%誘變,定點%轉染
기인,NOD2/CARD15%유변,정점%전염
背景:NOD2/CARD15基因序列单核苷酸多态性(SNP)与欧美人群的克罗恩病(CD)明显相关,其中R702W、G908R和3020insC 3个SNP位点与CD的相关性尤为显著.而日本、韩国以及我国香港和浙江地区的研究均未发现上述3个SNP的改变,但最近研究发现了可能与中国人CD相关的P268S突变.目的:构建P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体和体外转染体系,为研究突变型NOD2/CARD15的功能提供实验基础.方法:应用定点诱变技术构建P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人胚肾细胞HEK293T,以蛋白质印迹法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HEK293T细胞NOD2/CARD15的表达.结果:经克隆、酶切、测序证实获得P268S突变型NOD2/CARD15基因,突变载体转入HEK293T细胞后,NOD2/CARD15有效表达.结论:成功构建了P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体,阳离子脂质体是人胚肾细胞有效的体外转染体系.
揹景:NOD2/CARD15基因序列單覈苷痠多態性(SNP)與歐美人群的剋囉恩病(CD)明顯相關,其中R702W、G908R和3020insC 3箇SNP位點與CD的相關性尤為顯著.而日本、韓國以及我國香港和浙江地區的研究均未髮現上述3箇SNP的改變,但最近研究髮現瞭可能與中國人CD相關的P268S突變.目的:構建P268S突變型NOD2/CARD15真覈錶達載體和體外轉染體繫,為研究突變型NOD2/CARD15的功能提供實驗基礎.方法:應用定點誘變技術構建P268S突變型NOD2/CARD15真覈錶達載體,以暘離子脂質體介導體外轉染技術瞬時轉染人胚腎細胞HEK293T,以蛋白質印跡法和逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測HEK293T細胞NOD2/CARD15的錶達.結果:經剋隆、酶切、測序證實穫得P268S突變型NOD2/CARD15基因,突變載體轉入HEK293T細胞後,NOD2/CARD15有效錶達.結論:成功構建瞭P268S突變型NOD2/CARD15真覈錶達載體,暘離子脂質體是人胚腎細胞有效的體外轉染體繫.
배경:NOD2/CARD15기인서렬단핵감산다태성(SNP)여구미인군적극라은병(CD)명현상관,기중R702W、G908R화3020insC 3개SNP위점여CD적상관성우위현저.이일본、한국이급아국향항화절강지구적연구균미발현상술3개SNP적개변,단최근연구발현료가능여중국인CD상관적P268S돌변.목적:구건P268S돌변형NOD2/CARD15진핵표체재체화체외전염체계,위연구돌변형NOD2/CARD15적공능제공실험기출.방법:응용정점유변기술구건P268S돌변형NOD2/CARD15진핵표체재체,이양리자지질체개도체외전염기술순시전염인배신세포HEK293T,이단백질인적법화역전록취합매련반응(RT-PCR)검측HEK293T세포NOD2/CARD15적표체.결과:경극륭、매절、측서증실획득P268S돌변형NOD2/CARD15기인,돌변재체전입HEK293T세포후,NOD2/CARD15유효표체.결론:성공구건료P268S돌변형NOD2/CARD15진핵표체재체,양리자지질체시인배신세포유효적체외전염체계.
