第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2008年
2期
104-106
,共3页
谢桥生%雷小英%王立锋%孟艳玲%王芳%薛茜%温伟红%杨安钢
謝橋生%雷小英%王立鋒%孟豔玲%王芳%薛茜%溫偉紅%楊安鋼
사교생%뢰소영%왕립봉%맹염령%왕방%설천%온위홍%양안강
Smad3%RNA干扰%遗传载体%肿瘤生长抑制
Smad3%RNA榦擾%遺傳載體%腫瘤生長抑製
Smad3%RNA간우%유전재체%종류생장억제
目的:构建人Smad3的shRNA表达载体,运用RNAi下调Smad3基因在肿瘤细胞系中的表达,观察对肿瘤细胞生长的影响. 方法:化学合成针对人Smad3基因的dsRNA,瞬时转染入Hela细胞,检测RNA干扰效果,筛选有效干扰靶位点;设计并合成针对人Smad3基因的siRNA寡核苷酸链,经退火形成双链后克隆入质粒载体pSilencerTM3.1-H1 hygro,转染入Hela细胞,用hygromycin B筛选稳定单克隆细胞株,对细胞株行RT-PCR和Western Blot检测,观察siRNA对靶基因的抑制效果,进一步研究下调目的分子表达水平以后肿瘤细胞生长的变化. 结果:瞬时转染筛选到了有效的RNA干扰靶位点,构建载体后,建立稳定转染的单克隆细胞株,Smad3 mRNA和蛋白质水平均显著下调,导致肿瘤细胞生长抑制. 结论:成功构建了针对人Smad3高效、特异、作用持久的shRNA表达载体,转染细胞后可下调Smad3的表达,为进一步研究Smad3的功能和肿瘤的基因治疗奠定了基础.
目的:構建人Smad3的shRNA錶達載體,運用RNAi下調Smad3基因在腫瘤細胞繫中的錶達,觀察對腫瘤細胞生長的影響. 方法:化學閤成針對人Smad3基因的dsRNA,瞬時轉染入Hela細胞,檢測RNA榦擾效果,篩選有效榦擾靶位點;設計併閤成針對人Smad3基因的siRNA寡覈苷痠鏈,經退火形成雙鏈後剋隆入質粒載體pSilencerTM3.1-H1 hygro,轉染入Hela細胞,用hygromycin B篩選穩定單剋隆細胞株,對細胞株行RT-PCR和Western Blot檢測,觀察siRNA對靶基因的抑製效果,進一步研究下調目的分子錶達水平以後腫瘤細胞生長的變化. 結果:瞬時轉染篩選到瞭有效的RNA榦擾靶位點,構建載體後,建立穩定轉染的單剋隆細胞株,Smad3 mRNA和蛋白質水平均顯著下調,導緻腫瘤細胞生長抑製. 結論:成功構建瞭針對人Smad3高效、特異、作用持久的shRNA錶達載體,轉染細胞後可下調Smad3的錶達,為進一步研究Smad3的功能和腫瘤的基因治療奠定瞭基礎.
목적:구건인Smad3적shRNA표체재체,운용RNAi하조Smad3기인재종류세포계중적표체,관찰대종류세포생장적영향. 방법:화학합성침대인Smad3기인적dsRNA,순시전염입Hela세포,검측RNA간우효과,사선유효간우파위점;설계병합성침대인Smad3기인적siRNA과핵감산련,경퇴화형성쌍련후극륭입질립재체pSilencerTM3.1-H1 hygro,전염입Hela세포,용hygromycin B사선은정단극륭세포주,대세포주행RT-PCR화Western Blot검측,관찰siRNA대파기인적억제효과,진일보연구하조목적분자표체수평이후종류세포생장적변화. 결과:순시전염사선도료유효적RNA간우파위점,구건재체후,건립은정전염적단극륭세포주,Smad3 mRNA화단백질수평균현저하조,도치종류세포생장억제. 결론:성공구건료침대인Smad3고효、특이、작용지구적shRNA표체재체,전염세포후가하조Smad3적표체,위진일보연구Smad3적공능화종류적기인치료전정료기출.
