中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
7期
616-620
,共5页
顾园园%叶德富%陈君敏%姚小剑
顧園園%葉德富%陳君敏%姚小劍
고완완%협덕부%진군민%요소검
人类免疫缺陷病毒Ⅰ型%整合酶%蛋白纯化
人類免疫缺陷病毒Ⅰ型%整閤酶%蛋白純化
인류면역결함병독Ⅰ형%정합매%단백순화
目的 构建人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)整合酶(IN)142-288氨基酸蛋白的原核表达系统,对其进行表达、纯化及抗原性评价.方法 采用PER方法以野生型HIV-1 IN表达质粒为模板扩增IN142-288氨基酸cDNA片段.BamH Ⅰ与Xho Ⅰ双酶切消化后连接到表达载体pGEX一4T1中.构建pGEX-4T1-IN142-288质粒,并进行双酶切与测序鉴定.将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3).经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经液相层析纯化.将纯化后的IN142-288蛋白免疫BALB/c小鼠,对其抗原性进行评价.结果 pGEX-4T1-IN142-288质粒经过双酶切后可见清晰的载体条带和438bp插入的外源基因片段.SDS-PAGE和Western-blot方法对纯化的分析.可见一约40kDa的蛋白条带.ELISA法检测免疫小鼠的抗血清,结果显示3只小鼠均产生了较高滴度的抗体;Western-blot结果显示1号小鼠抗血清可以识别变性转移至NC膜上的野生型HIV-1 IN.结论 成功构建了pGEX-4T1-IN142-288质粒.在原核表达系统中表达的IN 142-288多肽抗原具有良好的抗原性.
目的 構建人類免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)整閤酶(IN)142-288氨基痠蛋白的原覈錶達繫統,對其進行錶達、純化及抗原性評價.方法 採用PER方法以野生型HIV-1 IN錶達質粒為模闆擴增IN142-288氨基痠cDNA片段.BamH Ⅰ與Xho Ⅰ雙酶切消化後連接到錶達載體pGEX一4T1中.構建pGEX-4T1-IN142-288質粒,併進行雙酶切與測序鑒定.將該質粒轉化大腸埃希菌BL21(DE3).經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,錶達產物經液相層析純化.將純化後的IN142-288蛋白免疫BALB/c小鼠,對其抗原性進行評價.結果 pGEX-4T1-IN142-288質粒經過雙酶切後可見清晰的載體條帶和438bp插入的外源基因片段.SDS-PAGE和Western-blot方法對純化的分析.可見一約40kDa的蛋白條帶.ELISA法檢測免疫小鼠的抗血清,結果顯示3隻小鼠均產生瞭較高滴度的抗體;Western-blot結果顯示1號小鼠抗血清可以識彆變性轉移至NC膜上的野生型HIV-1 IN.結論 成功構建瞭pGEX-4T1-IN142-288質粒.在原覈錶達繫統中錶達的IN 142-288多肽抗原具有良好的抗原性.
목적 구건인류면역결함병독Ⅰ형(HIV-1)정합매(IN)142-288안기산단백적원핵표체계통,대기진행표체、순화급항원성평개.방법 채용PER방법이야생형HIV-1 IN표체질립위모판확증IN142-288안기산cDNA편단.BamH Ⅰ여Xho Ⅰ쌍매절소화후련접도표체재체pGEX일4T1중.구건pGEX-4T1-IN142-288질립,병진행쌍매절여측서감정.장해질립전화대장애희균BL21(DE3).경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,표체산물경액상층석순화.장순화후적IN142-288단백면역BALB/c소서,대기항원성진행평개.결과 pGEX-4T1-IN142-288질립경과쌍매절후가견청석적재체조대화438bp삽입적외원기인편단.SDS-PAGE화Western-blot방법대순화적분석.가견일약40kDa적단백조대.ELISA법검측면역소서적항혈청,결과현시3지소서균산생료교고적도적항체;Western-blot결과현시1호소서항혈청가이식별변성전이지NC막상적야생형HIV-1 IN.결론 성공구건료pGEX-4T1-IN142-288질립.재원핵표체계통중표체적IN 142-288다태항원구유량호적항원성.
