军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2011年
6期
437-441
,共5页
王越%胡明明%阎瑾琦%张亮%王宇%朱运峰%于继云
王越%鬍明明%閻瑾琦%張亮%王宇%硃運峰%于繼雲
왕월%호명명%염근기%장량%왕우%주운봉%우계운
长散在核苷酸元件%细胞增殖%CCK-8%突变
長散在覈苷痠元件%細胞增殖%CCK-8%突變
장산재핵감산원건%세포증식%CCK-8%돌변
目的 探索L1(ORF1)基因过量表达对细胞增殖的影响.方法 PCR方法制备L1(ORF1)全长以及5′端不同截短的天然序列以及各种突变体,构建真核重组表达载体,利用脂质体方法瞬时转染HEK293细胞,Western 印迹方法验证蛋白表达,利用活细胞计数试剂盒(CCK-8)进行细胞增殖能力分析.结果 过表达天然全长蛋白[L1(ORF1)]的重组体能明显促进细胞增殖,终止密码位于第109个氨基酸位置的全长序列重组体[L1(ORF1)109]对细胞增殖同样具有非常明显的促进作用,但仅含有氨基端109个氨基酸的基因片段的重组体对细胞增殖没有促进作用.另外,终止密码位于其他位置的全长序列重组体[L1(ORF1)48,终止突变在第48个氨基酸位置]以及含有多处突变的全长序列重组体[L1(ORF1)m]对细胞的增殖也未见有显著影响.结论 L1(ORF1)全长序列编码蛋白具有显著地促进细胞增殖作用,同时在特殊位点含有终止突变的全长序列转录产物对细胞的增殖也具有显著促进作用,L1(ORF1)全长序列可能通过其编码的蛋白以及非编码RNA两种形式对细胞增殖进行调控,位于序列中的关键位点在此过程中起着重要的作用,为探索L1(ORF1)序列在细胞增殖中的调控机制奠定了基础.
目的 探索L1(ORF1)基因過量錶達對細胞增殖的影響.方法 PCR方法製備L1(ORF1)全長以及5′耑不同截短的天然序列以及各種突變體,構建真覈重組錶達載體,利用脂質體方法瞬時轉染HEK293細胞,Western 印跡方法驗證蛋白錶達,利用活細胞計數試劑盒(CCK-8)進行細胞增殖能力分析.結果 過錶達天然全長蛋白[L1(ORF1)]的重組體能明顯促進細胞增殖,終止密碼位于第109箇氨基痠位置的全長序列重組體[L1(ORF1)109]對細胞增殖同樣具有非常明顯的促進作用,但僅含有氨基耑109箇氨基痠的基因片段的重組體對細胞增殖沒有促進作用.另外,終止密碼位于其他位置的全長序列重組體[L1(ORF1)48,終止突變在第48箇氨基痠位置]以及含有多處突變的全長序列重組體[L1(ORF1)m]對細胞的增殖也未見有顯著影響.結論 L1(ORF1)全長序列編碼蛋白具有顯著地促進細胞增殖作用,同時在特殊位點含有終止突變的全長序列轉錄產物對細胞的增殖也具有顯著促進作用,L1(ORF1)全長序列可能通過其編碼的蛋白以及非編碼RNA兩種形式對細胞增殖進行調控,位于序列中的關鍵位點在此過程中起著重要的作用,為探索L1(ORF1)序列在細胞增殖中的調控機製奠定瞭基礎.
목적 탐색L1(ORF1)기인과량표체대세포증식적영향.방법 PCR방법제비L1(ORF1)전장이급5′단불동절단적천연서렬이급각충돌변체,구건진핵중조표체재체,이용지질체방법순시전염HEK293세포,Western 인적방법험증단백표체,이용활세포계수시제합(CCK-8)진행세포증식능력분석.결과 과표체천연전장단백[L1(ORF1)]적중조체능명현촉진세포증식,종지밀마위우제109개안기산위치적전장서렬중조체[L1(ORF1)109]대세포증식동양구유비상명현적촉진작용,단부함유안기단109개안기산적기인편단적중조체대세포증식몰유촉진작용.령외,종지밀마위우기타위치적전장서렬중조체[L1(ORF1)48,종지돌변재제48개안기산위치]이급함유다처돌변적전장서렬중조체[L1(ORF1)m]대세포적증식야미견유현저영향.결론 L1(ORF1)전장서렬편마단백구유현저지촉진세포증식작용,동시재특수위점함유종지돌변적전장서렬전록산물대세포적증식야구유현저촉진작용,L1(ORF1)전장서렬가능통과기편마적단백이급비편마RNA량충형식대세포증식진행조공,위우서렬중적관건위점재차과정중기착중요적작용,위탐색L1(ORF1)서렬재세포증식중적조공궤제전정료기출.
