中国油料作物学报
中國油料作物學報
중국유료작물학보
CHINESE JOURNAL OF OIL CROP SCIENCES
2012年
1期
8-15
,共8页
洪林%闫晓红%袁亚宾%刘王辉%胡长清%李晨%陈春丽%魏文辉
洪林%閆曉紅%袁亞賓%劉王輝%鬍長清%李晨%陳春麗%魏文輝
홍림%염효홍%원아빈%류왕휘%호장청%리신%진춘려%위문휘
甘蓝型油菜%精氨酸脱羧酶基因%同源克隆%RACE%原核表达
甘藍型油菜%精氨痠脫羧酶基因%同源剋隆%RACE%原覈錶達
감람형유채%정안산탈최매기인%동원극륭%RACE%원핵표체
利用同源克隆和RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术从甘蓝型油菜中克隆到精氨酸脱羧酶( Arginine decarboxylase,ADC)基因cDNA全长序列,命名为BnADC.BnADC全长为2 649bp,包含344bp的5 '非翻译区(5 ' Untranslated region,5'-UTR)、226bp的3 '非翻译区(3'Untranslated region,3'- UTR)和2 079bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码75.1kD的蛋白质.5'- UTR中含有12bp的uORF(Upstream open reading frame),编码MIRE 4个氨基酸.氨基酸同源性比对表明,BnADC蛋白与其他植物ADC蛋白具有很高的相似性,与芥菜的同源性高达93％；系统进化树分析表明,BnADC与芥菜、拟南芥的ADC亲缘关系较近.在获得全长cDNA的基础上,构建融合表达载体pET30a(+)- BnADC,转化大肠杆菌(Escherichia coli表达菌株BL21( DE3),SDS -PAGE检测到一个约81.1kD的融合蛋白被E.coil表达,且融合蛋白主要存在于菌体沉淀中.
利用同源剋隆和RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技術從甘藍型油菜中剋隆到精氨痠脫羧酶( Arginine decarboxylase,ADC)基因cDNA全長序列,命名為BnADC.BnADC全長為2 649bp,包含344bp的5 '非翻譯區(5 ' Untranslated region,5'-UTR)、226bp的3 '非翻譯區(3'Untranslated region,3'- UTR)和2 079bp的完整開放閱讀框(open reading frame,ORF),編碼75.1kD的蛋白質.5'- UTR中含有12bp的uORF(Upstream open reading frame),編碼MIRE 4箇氨基痠.氨基痠同源性比對錶明,BnADC蛋白與其他植物ADC蛋白具有很高的相似性,與芥菜的同源性高達93％；繫統進化樹分析錶明,BnADC與芥菜、擬南芥的ADC親緣關繫較近.在穫得全長cDNA的基礎上,構建融閤錶達載體pET30a(+)- BnADC,轉化大腸桿菌(Escherichia coli錶達菌株BL21( DE3),SDS -PAGE檢測到一箇約81.1kD的融閤蛋白被E.coil錶達,且融閤蛋白主要存在于菌體沉澱中.
이용동원극륭화RACE(Rapid amplification of cDNA ends)기술종감람형유채중극륭도정안산탈최매( Arginine decarboxylase,ADC)기인cDNA전장서렬,명명위BnADC.BnADC전장위2 649bp,포함344bp적5 '비번역구(5 ' Untranslated region,5'-UTR)、226bp적3 '비번역구(3'Untranslated region,3'- UTR)화2 079bp적완정개방열독광(open reading frame,ORF),편마75.1kD적단백질.5'- UTR중함유12bp적uORF(Upstream open reading frame),편마MIRE 4개안기산.안기산동원성비대표명,BnADC단백여기타식물ADC단백구유흔고적상사성,여개채적동원성고체93％；계통진화수분석표명,BnADC여개채、의남개적ADC친연관계교근.재획득전장cDNA적기출상,구건융합표체재체pET30a(+)- BnADC,전화대장간균(Escherichia coli표체균주BL21( DE3),SDS -PAGE검측도일개약81.1kD적융합단백피E.coil표체,차융합단백주요존재우균체침정중.
