色谱
色譜
색보
CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2012年
5期
533-537
,共5页
陈丽宇%张立坚%张良滔%蔡春
陳麗宇%張立堅%張良滔%蔡春
진려우%장립견%장량도%채춘
液相色谱-串联质谱%5-羟甲基胞嘧啶%脱氧核糖核酸羟甲基化%组织
液相色譜-串聯質譜%5-羥甲基胞嘧啶%脫氧覈糖覈痠羥甲基化%組織
액상색보-천련질보%5-간갑기포밀정%탈양핵당핵산간갑기화%조직
5-羟甲基胞嘧啶通过阻止脱氧核糖核酸(DNA)甲基化转移酶l(DMNT1)甲基化胞嘧啶来影响DNA甲基化的程度.本文建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定组织中全基因组5-羟甲基胞嘧啶水平的方法.采用苯酚-氯仿提取组织DNA.提取的DNA用88％甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,加乙腈(9:1.v/v)溶解,用LC-MS/MS检测5-羟甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中5-羟甲基胞嘧啶的水乎.结果表明,5-羟甲基胞嘧啶的线性范围为0.1～30 ng/mL,相关系数为0.996 9,检出限(信噪比为3计)和定量限(信噪比为10计)分别为0.057 ng/mL和0.090 ng/mL;日内相对标准偏差和日间相对标准偏差分别为5.13％和6.24％；加标回收率为90.24％～97.53％.用该方法检测了大鼠大脑组织DNA羟甲基化水平,平均结果为0.66％.该方法简便,重现性好,灵敏度较高,能满足全基因组5-羟甲基胞嘧啶定量检测的要求.
5-羥甲基胞嘧啶通過阻止脫氧覈糖覈痠(DNA)甲基化轉移酶l(DMNT1)甲基化胞嘧啶來影響DNA甲基化的程度.本文建立瞭液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)測定組織中全基因組5-羥甲基胞嘧啶水平的方法.採用苯酚-氯倣提取組織DNA.提取的DNA用88％甲痠在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作內標,經N2吹榦後,加乙腈(9:1.v/v)溶解,用LC-MS/MS檢測5-羥甲基胞嘧啶的含量,併計算全基因組中5-羥甲基胞嘧啶的水乎.結果錶明,5-羥甲基胞嘧啶的線性範圍為0.1～30 ng/mL,相關繫數為0.996 9,檢齣限(信譟比為3計)和定量限(信譟比為10計)分彆為0.057 ng/mL和0.090 ng/mL;日內相對標準偏差和日間相對標準偏差分彆為5.13％和6.24％；加標迴收率為90.24％～97.53％.用該方法檢測瞭大鼠大腦組織DNA羥甲基化水平,平均結果為0.66％.該方法簡便,重現性好,靈敏度較高,能滿足全基因組5-羥甲基胞嘧啶定量檢測的要求.
5-간갑기포밀정통과조지탈양핵당핵산(DNA)갑기화전이매l(DMNT1)갑기화포밀정래영향DNA갑기화적정도.본문건립료액상색보-천련질보(LC-MS/MS)측정조직중전기인조5-간갑기포밀정수평적방법.채용분분-록방제취조직DNA.제취적DNA용88％갑산재140℃하렬해,DNA렬해액가입동위소포밀정작내표,경N2취간후,가을정(9:1.v/v)용해,용LC-MS/MS검측5-간갑기포밀정적함량,병계산전기인조중5-간갑기포밀정적수호.결과표명,5-간갑기포밀정적선성범위위0.1～30 ng/mL,상관계수위0.996 9,검출한(신조비위3계)화정량한(신조비위10계)분별위0.057 ng/mL화0.090 ng/mL;일내상대표준편차화일간상대표준편차분별위5.13％화6.24％；가표회수솔위90.24％～97.53％.용해방법검측료대서대뇌조직DNA간갑기화수평,평균결과위0.66％.해방법간편,중현성호,령민도교고,능만족전기인조5-간갑기포밀정정량검측적요구.
