CAJ | 학술논문

目的研究去除C末端356～393氨基酸p53对人肺癌细胞恶性增殖抑制的影响.方法利用DNA重组技术,构建去掉C末端356～393区37个氨基酸残基p53和全长p53真核细胞表达质粒[pEGFP-p53(del),pEGFP-p53].p53缺失和突变的人肺癌细胞系801D为受体细胞,lipofectin介导质粒转染细胞.G418筛选,建立转染克隆细胞系.以PCR、荧光显微镜检查外源基因的表达;以集落形成和裸鼠移植瘤试验检测细胞体内外恶性增殖能力;以移植瘤或接种部位细胞团印片检查荧光蛋白表达.结果建立了转染克隆细胞系pEGFP-p53-801D、pEGFP-p53(del)-801D和pEGFP-801D,证明有外源p53基因存在和外源绿色荧光蛋白基因表达.pEGFP-p53(del)-801D体外集落形成抑制率为99.6%,pEGFP-p53-801D为81.1%,pEGFP-p53(del)-801D细胞恶性增殖能力明显低于pEGFP-p53-801D(P＜0.01).pEGFP-p53(del)-801D形成的少数集落也有外源p53基因和绿色荧光蛋白表达.裸鼠移植瘤试验显示,对照组801D和pEGFP-801D移植瘤为阳性(4/4,4/4),pEGFP-p53(del)-801D和pEGFP-p53-801D移植瘤为阴性,接种细胞部位仍有残留细胞团存在,有少数表达荧光蛋白的活细胞.结论去除C末端356～393氨基酸的p53,在体外可明显增加对p53突变和缺失的人肺癌细胞恶性增殖的抑制作用.外源p53对癌细胞恶性增殖抑制作用表现为异质性.
목적연구거제C말단356～393안기산p53대인폐암세포악성증식억제적영향.방법 이용DNA중조기술,구건거도C말단356～393구37개안기산잔기p53화전장p53진핵세포표체질립[pEGFP-p53(del),pEGFP-p53].p53결실화돌변적인폐암세포계801D위수체세포,lipofectin개도질립전염세포.G418사선,건립전염극륭세포계.이PCR、형광현미경검사외원기인적표체;이집락형성화라서이식류시험검측세포체내외악성증식능력;이이식류혹접충부위세포단인편검사형광단백표체.결과건립료전염극륭세포계pEGFP-p53-801D、pEGFP-p53(del)-801D화pEGFP-801D,증명유외원p53기인존재화외원록색형광단백기인표체.pEGFP-p53(del)-801D체외집락형성억제솔위99.6%,pEGFP-p53-801D위81.1%,pEGFP-p53(del)-801D세포악성증식능력명현저우pEGFP-p53-801D(P＜0.01).pEGFP-p53(del)-801D형성적소수집락야유외원p53기인화록색형광단백표체.라서이식류시험현시,대조조801D화pEGFP-801D이식류위양성(4/4,4/4),pEGFP-p53(del)-801D화pEGFP-p53-801D이식류위음성,접충세포부위잉유잔류세포단존재,유소수표체형광단백적활세포.결론거제C말단356～393안기산적p53,재체외가명현증가대p53돌변화결실적인폐암세포악성증식적억제작용.외원p53대암세포악성증식억제작용표현위이질성.