四川农业大学学报
四川農業大學學報
사천농업대학학보
JOURNAL OF SICHUAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2005年
2期
163-167
,共5页
严吉明%崔林开%叶华智%张敏%伍光庆
嚴吉明%崔林開%葉華智%張敏%伍光慶
엄길명%최림개%협화지%장민%오광경
苏云金杆菌HD-1%Bt晶体蛋白%免疫%抗体%效价%免疫球蛋白
囌雲金桿菌HD-1%Bt晶體蛋白%免疫%抗體%效價%免疫毬蛋白
소운금간균HD-1%Bt정체단백%면역%항체%효개%면역구단백
用碳酸钠裂解液(50mmol/L Na2CO3,50?mmol/L EDTA,pH 10)从Bacillus thuringiensis HD-1的孢晶混合物中分离提取杀虫蛋白的基础上,进一步用聚丙烯酰胺凝胶制备电泳技术纯化杀虫蛋白,获得了高纯度的杀虫蛋白作为抗原,用于免疫家兔制备抗体.比较了不同抗原注射剂量的免疫效应和免疫过程中(不同注射时间)抗体生成量的变化.结果表明,供试的二种抗原注射剂量对抗体的效价无明显影响,随着免疫次数的增加抗体效价不断上升,最终获得了用琼脂双扩散测定效价为1/120的抗血清.Bt杀虫蛋白的免疫原性低.抗血清中的抗体免疫球蛋白(Ig),首先经硫酸铵分级沉淀粗提,再用DEAE-52纤维素柱层析提取纯化,获得了高纯度的IgG,为抗体的酶标记和ELISA检测杀虫蛋白等研究提供了高特异性的Bt抗体.研究的结果为Bt菌HD-1杀虫蛋白抗体的制备提供了依据.
用碳痠鈉裂解液(50mmol/L Na2CO3,50?mmol/L EDTA,pH 10)從Bacillus thuringiensis HD-1的孢晶混閤物中分離提取殺蟲蛋白的基礎上,進一步用聚丙烯酰胺凝膠製備電泳技術純化殺蟲蛋白,穫得瞭高純度的殺蟲蛋白作為抗原,用于免疫傢兔製備抗體.比較瞭不同抗原註射劑量的免疫效應和免疫過程中(不同註射時間)抗體生成量的變化.結果錶明,供試的二種抗原註射劑量對抗體的效價無明顯影響,隨著免疫次數的增加抗體效價不斷上升,最終穫得瞭用瓊脂雙擴散測定效價為1/120的抗血清.Bt殺蟲蛋白的免疫原性低.抗血清中的抗體免疫毬蛋白(Ig),首先經硫痠銨分級沉澱粗提,再用DEAE-52纖維素柱層析提取純化,穫得瞭高純度的IgG,為抗體的酶標記和ELISA檢測殺蟲蛋白等研究提供瞭高特異性的Bt抗體.研究的結果為Bt菌HD-1殺蟲蛋白抗體的製備提供瞭依據.
용탄산납렬해액(50mmol/L Na2CO3,50?mmol/L EDTA,pH 10)종Bacillus thuringiensis HD-1적포정혼합물중분리제취살충단백적기출상,진일보용취병희선알응효제비전영기술순화살충단백,획득료고순도적살충단백작위항원,용우면역가토제비항체.비교료불동항원주사제량적면역효응화면역과정중(불동주사시간)항체생성량적변화.결과표명,공시적이충항원주사제량대항체적효개무명현영향,수착면역차수적증가항체효개불단상승,최종획득료용경지쌍확산측정효개위1/120적항혈청.Bt살충단백적면역원성저.항혈청중적항체면역구단백(Ig),수선경류산안분급침정조제,재용DEAE-52섬유소주층석제취순화,획득료고순도적IgG,위항체적매표기화ELISA검측살충단백등연구제공료고특이성적Bt항체.연구적결과위Bt균HD-1살충단백항체적제비제공료의거.
