江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2007年
2期
85-88
,共4页
樱花%RAPD%反应体系%优化
櫻花%RAPD%反應體繫%優化
앵화%RAPD%반응체계%우화
为确保樱花RAPD扩增结果的稳定性和重复性,对Mg2+、dNTP、引物、模板DNA浓度、Taq酶用量、退火温度,以及PCR循环次数等影响樱花RAPD结果的重要因素进行了初步探索.试验表明,樱花RAPD扩增最适反应体系为20μl反应液中:1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTP,1 U Taq酶,0.2 μmol/L 10bp随机引物,20～30 ng模板DNA.最佳扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸2 min,循环40次,最后72℃延伸10 min,12℃保存.
為確保櫻花RAPD擴增結果的穩定性和重複性,對Mg2+、dNTP、引物、模闆DNA濃度、Taq酶用量、退火溫度,以及PCR循環次數等影響櫻花RAPD結果的重要因素進行瞭初步探索.試驗錶明,櫻花RAPD擴增最適反應體繫為20μl反應液中:1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTP,1 U Taq酶,0.2 μmol/L 10bp隨機引物,20～30 ng模闆DNA.最佳擴增程序為:94℃預變性4 min,94℃變性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸2 min,循環40次,最後72℃延伸10 min,12℃保存.
위학보앵화RAPD확증결과적은정성화중복성,대Mg2+、dNTP、인물、모판DNA농도、Taq매용량、퇴화온도,이급PCR순배차수등영향앵화RAPD결과적중요인소진행료초보탐색.시험표명,앵화RAPD확증최괄반응체계위20μl반응액중:1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTP,1 U Taq매,0.2 μmol/L 10bp수궤인물,20～30 ng모판DNA.최가확증정서위:94℃예변성4 min,94℃변성30 s,38℃퇴화30 s,72℃연신2 min,순배40차,최후72℃연신10 min,12℃보존.
