免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2007年
3期
339-343
,共5页
廖志勇%王压娣%温坤%丘立文%狄飚%袁国勇%车小燕
廖誌勇%王壓娣%溫坤%丘立文%狄飚%袁國勇%車小燕
료지용%왕압제%온곤%구립문%적표%원국용%차소연
禽流感病毒H5N1%H5血凝素%单克隆抗体%酶联免疫吸附试验
禽流感病毒H5N1%H5血凝素%單剋隆抗體%酶聯免疫吸附試驗
금류감병독H5N1%H5혈응소%단극륭항체%매련면역흡부시험
目的 制备和鉴定禽流感病毒(H5N1)血凝素(H5)特异性单克隆抗体(mAb),建立H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.方法 以H5血凝素和携带H5全长基因的质粒免疫Balb/c小鼠制备mAb,利用血凝抑制(HI)实验筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验筛选捕获抗体和检测抗体,建立测定H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.结果 获得16株特异性针对H5的单克隆抗体,与A型流感病毒H1、H3、H7、H9和B型流感病毒的血凝素无HI交叉反应,对H5血凝素的血凝抑制效价为1:100～1:51 200;通过配对实验,建立以单克隆抗体H5M9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记单克隆抗体H5M11为检测抗体的双抗体夹心ELISA;检测多株H5N1病毒和H5血凝素的最低检出值为1/32血凝单位,检测A型流感病毒H1N1、H3N2、B型流感病毒以及H7、H9血凝素均为阴性.结论 建立了一种灵敏度高、特异性强的测定H5抗原的ELISA捕获法,可应用于禽流感病毒H5N1感染的实验室早期诊断.
目的 製備和鑒定禽流感病毒(H5N1)血凝素(H5)特異性單剋隆抗體(mAb),建立H5抗原的雙抗體夾心ELISA捕穫法.方法 以H5血凝素和攜帶H5全長基因的質粒免疫Balb/c小鼠製備mAb,利用血凝抑製(HI)實驗篩選和鑒定,通過競爭抑製試驗分析抗體識彆錶位,併採用抗體配對試驗篩選捕穫抗體和檢測抗體,建立測定H5抗原的雙抗體夾心ELISA捕穫法.結果 穫得16株特異性針對H5的單剋隆抗體,與A型流感病毒H1、H3、H7、H9和B型流感病毒的血凝素無HI交扠反應,對H5血凝素的血凝抑製效價為1:100～1:51 200;通過配對實驗,建立以單剋隆抗體H5M9為捕穫抗體,辣根過氧化物酶標記單剋隆抗體H5M11為檢測抗體的雙抗體夾心ELISA;檢測多株H5N1病毒和H5血凝素的最低檢齣值為1/32血凝單位,檢測A型流感病毒H1N1、H3N2、B型流感病毒以及H7、H9血凝素均為陰性.結論 建立瞭一種靈敏度高、特異性彊的測定H5抗原的ELISA捕穫法,可應用于禽流感病毒H5N1感染的實驗室早期診斷.
목적 제비화감정금류감병독(H5N1)혈응소(H5)특이성단극륭항체(mAb),건립H5항원적쌍항체협심ELISA포획법.방법 이H5혈응소화휴대H5전장기인적질립면역Balb/c소서제비mAb,이용혈응억제(HI)실험사선화감정,통과경쟁억제시험분석항체식별표위,병채용항체배대시험사선포획항체화검측항체,건립측정H5항원적쌍항체협심ELISA포획법.결과 획득16주특이성침대H5적단극륭항체,여A형류감병독H1、H3、H7、H9화B형류감병독적혈응소무HI교차반응,대H5혈응소적혈응억제효개위1:100～1:51 200;통과배대실험,건립이단극륭항체H5M9위포획항체,랄근과양화물매표기단극륭항체H5M11위검측항체적쌍항체협심ELISA;검측다주H5N1병독화H5혈응소적최저검출치위1/32혈응단위,검측A형류감병독H1N1、H3N2、B형류감병독이급H7、H9혈응소균위음성.결론 건립료일충령민도고、특이성강적측정H5항원적ELISA포획법,가응용우금류감병독H5N1감염적실험실조기진단.
