畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
6期
842-847
,共6页
乔新安%李宏基%王月影%朱彦彩%韩立强%杨国宇%王艳玲
喬新安%李宏基%王月影%硃彥綵%韓立彊%楊國宇%王豔玲
교신안%리굉기%왕월영%주언채%한립강%양국우%왕염령
绵羊%黏膜相关上皮趋化因子%分子克隆%序列分析%原核表达
綿羊%黏膜相關上皮趨化因子%分子剋隆%序列分析%原覈錶達
면양%점막상관상피추화인자%분자극륭%서렬분석%원핵표체
利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamH Ⅰ/Xho Ⅰ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定.克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在.为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础.
利用同源序列剋隆原理設計1對剋隆引物,從綿羊結腸黏膜組織提取mRNA,通過RT-PCR穫得CCL28基因,將PCR產物剋隆、測序,併進行序列分析;再根據剋隆的序列設計1對錶達引物,用PCR法從重組剋隆載體中擴增齣含BamH Ⅰ/Xho Ⅰ酶切位點的CCL28片段,雙酶切後亞剋隆至pGEX-4T-1載體,構建重組原覈錶達載體pGEX-CCL28,轉化宿主菌E.coli BL21(DE3),經IPTG誘導進行錶達,SDS-PAGE鑒定.剋隆的綿羊CCL28基因包含完整的開放閱讀框,剋隆片段長444 bp,ORF為387 bp,編碼129箇氨基痠,與人、小鼠、豬、牛該基因的同源性分彆為76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推測的氨基痠序列與人、小鼠、豬、牛的同源性分彆為76%、63%、84%和93%,錶達的融閤蛋白分子量約為39 ku,併以包涵體形式存在.為下一步研究綿羊CCL28的生物學功能奠定基礎.
이용동원서렬극륭원리설계1대극륭인물,종면양결장점막조직제취mRNA,통과RT-PCR획득CCL28기인,장PCR산물극륭、측서,병진행서렬분석;재근거극륭적서렬설계1대표체인물,용PCR법종중조극륭재체중확증출함BamH Ⅰ/Xho Ⅰ매절위점적CCL28편단,쌍매절후아극륭지pGEX-4T-1재체,구건중조원핵표체재체pGEX-CCL28,전화숙주균E.coli BL21(DE3),경IPTG유도진행표체,SDS-PAGE감정.극륭적면양CCL28기인포함완정적개방열독광,극륭편단장444 bp,ORF위387 bp,편마129개안기산,여인、소서、저、우해기인적동원성분별위76.4%、61.4%、84.3%화92.9%,추측적안기산서렬여인、소서、저、우적동원성분별위76%、63%、84%화93%,표체적융합단백분자량약위39 ku,병이포함체형식존재.위하일보연구면양CCL28적생물학공능전정기출.
