坏死梭杆菌白细胞毒素基因SH片段的克隆与表达
배사사간균백세포독소기인SH편단적극륭여표체
Cloning and Expression of the Leukotoxin Gene SH from Fusobacterium necrophorum
  • 万方数据
    特产研究 특산연구
    SPECIAL WILD ECONOMIC ANIMAL AND PLANT RESEARCH
    2009年 1期 14-18 ,共5页

    赵利芳%陈立志%张秀华%冯书章%王克坚%刘晓颖%陆伟%冯凯%王秀东%姚志利

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    坏死梭杆菌%SH%克隆%表达 壞死梭桿菌%SH%剋隆%錶達
    배사사간균%SH%극륭%표체
    坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因(lkt)是其编码基因.以分离到的国内牛源坏死梭杆菌FN(A)菌株F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增白细胞毒素基因sH片段,克隆至pMD18-T载体上,以BamH I和HindⅢ酶切的目的片段sH与相应酶切的pET32a载体连接构建pET32a-sH重组表达质粒,经转化E coli BL21(DE3)后用IPTG进行蛋白诱导,SDS-PAGE检测重组蛋向表达情况.结果表明:扩增基因序列大小为1800 bp,SDS-PAGE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2 kDa的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经Western-blot证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性.
    배사사간균백세포독소시배사간균병적주요치병인자,백세포독소기인(lkt)시기편마기인.이분리도적국내우원배사사간균FN(A)균주F4기인조DNA위모판,응용PCR방법확증백세포독소기인sH편단,극륭지pMD18-T재체상,이BamH I화HindⅢ매절적목적편단sH여상응매절적pET32a재체련접구건pET32a-sH중조표체질립,경전화E coli BL21(DE3)후용IPTG진행단백유도,SDS-PAGE검측중조단향표체정황.결과표명:확증기인서렬대소위1800 bp,SDS-PAGE검측중조단백유효표체,표체득도대소위80.2 kDa적목적단백,채용얼주친화층석방법순화SH중조단백,획득료순도체95%적중조단백;경Western-blot증실,해단백대항배사간균양성혈청구유반응활성.
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