军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2010年
3期
225-229
,共5页
化晓莉%乔春霞%黎燕%张学光
化曉莉%喬春霞%黎燕%張學光
화효리%교춘하%려연%장학광
CD40%抗体,单克隆%杂交瘤%嵌合抗体%真核表达
CD40%抗體,單剋隆%雜交瘤%嵌閤抗體%真覈錶達
CD40%항체,단극륭%잡교류%감합항체%진핵표체
目的 构建抗CD40嵌合抗体的真核表达载体,实现在真核细胞中的高效表达.方法 采用RT-PCR法,从分泌鼠源抗人CD40抗体的杂交瘤细胞系5C11中钓取其轻、重链基因,进行序列测定.将5C11轻重链可变区基因分别克隆入表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体(c5C11)的轻链真核表达载体5C11L-pCMV及重链真核表达载体5C11H-pCMV.将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,利用夹心ELISA法测定上清中c5C11的浓度,通过流式细胞术检测c5C11与膜抗原的特异性结合.通过生物信息学相关方法对c5C11的氨基酸序列进行合理改造,尝试在保持生物学功能的基础上提高c5C11的表达量.结果 成功钓取鼠源单抗5C11的轻重链可变区基因并构建了真核表达载体,实现了c5C11的分泌表达;嵌合抗体较好地保留了鼠源母本抗体的抗原识别能力.利用计算机辅助设计,一定程度上提高了c5C11的表达量.结论 为后续研究嵌合抗CD40抗体对B淋巴瘤等肿瘤的治疗提供了一定的依据.
目的 構建抗CD40嵌閤抗體的真覈錶達載體,實現在真覈細胞中的高效錶達.方法 採用RT-PCR法,從分泌鼠源抗人CD40抗體的雜交瘤細胞繫5C11中釣取其輕、重鏈基因,進行序列測定.將5C11輕重鏈可變區基因分彆剋隆入錶達載體pCMV-VH和pCMV-VL,構建成嵌閤抗體(c5C11)的輕鏈真覈錶達載體5C11L-pCMV及重鏈真覈錶達載體5C11H-pCMV.將嵌閤抗體的輕重鏈真覈錶達載體共轉染入293T細胞,利用夾心ELISA法測定上清中c5C11的濃度,通過流式細胞術檢測c5C11與膜抗原的特異性結閤.通過生物信息學相關方法對c5C11的氨基痠序列進行閤理改造,嘗試在保持生物學功能的基礎上提高c5C11的錶達量.結果 成功釣取鼠源單抗5C11的輕重鏈可變區基因併構建瞭真覈錶達載體,實現瞭c5C11的分泌錶達;嵌閤抗體較好地保留瞭鼠源母本抗體的抗原識彆能力.利用計算機輔助設計,一定程度上提高瞭c5C11的錶達量.結論 為後續研究嵌閤抗CD40抗體對B淋巴瘤等腫瘤的治療提供瞭一定的依據.
목적 구건항CD40감합항체적진핵표체재체,실현재진핵세포중적고효표체.방법 채용RT-PCR법,종분비서원항인CD40항체적잡교류세포계5C11중조취기경、중련기인,진행서렬측정.장5C11경중련가변구기인분별극륭입표체재체pCMV-VH화pCMV-VL,구건성감합항체(c5C11)적경련진핵표체재체5C11L-pCMV급중련진핵표체재체5C11H-pCMV.장감합항체적경중련진핵표체재체공전염입293T세포,이용협심ELISA법측정상청중c5C11적농도,통과류식세포술검측c5C11여막항원적특이성결합.통과생물신식학상관방법대c5C11적안기산서렬진행합리개조,상시재보지생물학공능적기출상제고c5C11적표체량.결과 성공조취서원단항5C11적경중련가변구기인병구건료진핵표체재체,실현료c5C11적분비표체;감합항체교호지보류료서원모본항체적항원식별능력.이용계산궤보조설계,일정정도상제고료c5C11적표체량.결론 위후속연구감합항CD40항체대B림파류등종류적치료제공료일정적의거.
