山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2010年
34期
20-22
,共3页
余新%刘天德%洪波%李国惠%邵江华
餘新%劉天德%洪波%李國惠%邵江華
여신%류천덕%홍파%리국혜%소강화
类泛素基因%人胚肾细胞系%真核质粒%基因转染
類汎素基因%人胚腎細胞繫%真覈質粒%基因轉染
류범소기인%인배신세포계%진핵질립%기인전염
目的 构建类泛素基因FAT10的真核表达质粒,观察其蛋白在转染人胚肾细胞系293T中的表达.方法 采用RT-PCR法扩增FAT10全长基因片段后,克隆至pMD18-T载体进行测序分析,将FAT10克隆至pcDNA5-FRT表达载体并行酶切鉴定;用脂质体LipofectamineTM2000分别介导空质粒(空载组)及重组质粒(FAT10质粒组)转染293T细胞,以脂质体混合PBS(PBS组)及未加入脂质体(未转染组)作为对照.转染48 h后,收集细胞.采用Western blot法检测293T 细胞中的FAT10蛋白.结果 pMD18-FAT10重组质粒经双酶切获得498 bp片段,对PCR产物及498 bp片段进行测序,结果与GenBank报道序列完全一致.FAT10质粒组、未转染组、空载体组和PBS组FAT10蛋白表达量分别为1.556±0.072、0.334±0.051、0.425±0.095、0.382±0.063,FAT10质粒组与未转染组、空载体组和PBS组比较,P均<0.05.结论 成功构建了FAT10的真核表达质粒pcDNA5-FRT-FAT10,FAT10蛋白在293T细胞中高表达.
目的 構建類汎素基因FAT10的真覈錶達質粒,觀察其蛋白在轉染人胚腎細胞繫293T中的錶達.方法 採用RT-PCR法擴增FAT10全長基因片段後,剋隆至pMD18-T載體進行測序分析,將FAT10剋隆至pcDNA5-FRT錶達載體併行酶切鑒定;用脂質體LipofectamineTM2000分彆介導空質粒(空載組)及重組質粒(FAT10質粒組)轉染293T細胞,以脂質體混閤PBS(PBS組)及未加入脂質體(未轉染組)作為對照.轉染48 h後,收集細胞.採用Western blot法檢測293T 細胞中的FAT10蛋白.結果 pMD18-FAT10重組質粒經雙酶切穫得498 bp片段,對PCR產物及498 bp片段進行測序,結果與GenBank報道序列完全一緻.FAT10質粒組、未轉染組、空載體組和PBS組FAT10蛋白錶達量分彆為1.556±0.072、0.334±0.051、0.425±0.095、0.382±0.063,FAT10質粒組與未轉染組、空載體組和PBS組比較,P均<0.05.結論 成功構建瞭FAT10的真覈錶達質粒pcDNA5-FRT-FAT10,FAT10蛋白在293T細胞中高錶達.
목적 구건류범소기인FAT10적진핵표체질립,관찰기단백재전염인배신세포계293T중적표체.방법 채용RT-PCR법확증FAT10전장기인편단후,극륭지pMD18-T재체진행측서분석,장FAT10극륭지pcDNA5-FRT표체재체병행매절감정;용지질체LipofectamineTM2000분별개도공질립(공재조)급중조질립(FAT10질립조)전염293T세포,이지질체혼합PBS(PBS조)급미가입지질체(미전염조)작위대조.전염48 h후,수집세포.채용Western blot법검측293T 세포중적FAT10단백.결과 pMD18-FAT10중조질립경쌍매절획득498 bp편단,대PCR산물급498 bp편단진행측서,결과여GenBank보도서렬완전일치.FAT10질립조、미전염조、공재체조화PBS조FAT10단백표체량분별위1.556±0.072、0.334±0.051、0.425±0.095、0.382±0.063,FAT10질립조여미전염조、공재체조화PBS조비교,P균<0.05.결론 성공구건료FAT10적진핵표체질립pcDNA5-FRT-FAT10,FAT10단백재293T세포중고표체.
