南昌大学学报（医学版）
南昌大學學報（醫學版）
남창대학학보（의학판）
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE JIANGXI
2010年
10期
37-42
,共6页
周文胜%张剑%李朝霞%文三立%江红群%朱亲耀
週文勝%張劍%李朝霞%文三立%江紅群%硃親耀
주문성%장검%리조하%문삼립%강홍군%주친요
鼻咽癌%Survivin%p53%hTERT启动子%靶向治疗
鼻嚥癌%Survivin%p53%hTERT啟動子%靶嚮治療
비인암%Survivin%p53%hTERT계동자%파향치료
目的 研究Survivin表达下调和p53过表达对鼻咽癌细胞CNE-2的靶向杀伤作用.方法 扩增hTERT启动子不同区段,构建真核表达质粒pcDNA3.1-hTERT-Survivin,用于启动Survivin反义寡核苷酸的表达;扩增p53基因,克隆到pcDNA3.1质粒中,构建p53的过表达载体pcDNA3.1-p53;联合pcDNA3.1-hTERT-Survivin和pcDNA3.1-p53转染鼻咽癌细胞株CNE-2,RT-PCR和免疫印迹法检测p53和Survivin的表达情况,MTT法检测CNE-2细胞活率情况,Annexin V/PI双染色法检测共转后的细胞凋亡情况.结果 成功扩增270 bp和728 bp 2种不同大小片断的hTERT启动子区域,并与CMV增强子连接,以GFP为报告基因检测发现,270 bp启动子区段能较有效启动基因的表达;进一步成功构建Survivin反义寡核苷酸表达质粒pcDNA3.1-hTERT-Survivin和p53过表达载体pcDNA3.1-p53;转染鼻咽癌细胞株CNE-2后检测表明Survivin表达下调和p53表达上调;MTT和流式细胞检测显示联合转染pcDNA3.1-hTERT-Survivin和pcDNA3.1-p53可诱导鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡.结论 利用hTERT启动子和CMV增强子可有效启动Survivin反义寡核苷酸的表达转染鼻咽癌细胞CNE-2后可抑制Survivin的表达,同时联合过表达p53基因后,可以有效诱导鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡,提示该方法可以成为有效治疗鼻咽癌的一种新的靶向治疗方法.
目的 研究Survivin錶達下調和p53過錶達對鼻嚥癌細胞CNE-2的靶嚮殺傷作用.方法 擴增hTERT啟動子不同區段,構建真覈錶達質粒pcDNA3.1-hTERT-Survivin,用于啟動Survivin反義寡覈苷痠的錶達;擴增p53基因,剋隆到pcDNA3.1質粒中,構建p53的過錶達載體pcDNA3.1-p53;聯閤pcDNA3.1-hTERT-Survivin和pcDNA3.1-p53轉染鼻嚥癌細胞株CNE-2,RT-PCR和免疫印跡法檢測p53和Survivin的錶達情況,MTT法檢測CNE-2細胞活率情況,Annexin V/PI雙染色法檢測共轉後的細胞凋亡情況.結果 成功擴增270 bp和728 bp 2種不同大小片斷的hTERT啟動子區域,併與CMV增彊子連接,以GFP為報告基因檢測髮現,270 bp啟動子區段能較有效啟動基因的錶達;進一步成功構建Survivin反義寡覈苷痠錶達質粒pcDNA3.1-hTERT-Survivin和p53過錶達載體pcDNA3.1-p53;轉染鼻嚥癌細胞株CNE-2後檢測錶明Survivin錶達下調和p53錶達上調;MTT和流式細胞檢測顯示聯閤轉染pcDNA3.1-hTERT-Survivin和pcDNA3.1-p53可誘導鼻嚥癌細胞株CNE-2的凋亡.結論 利用hTERT啟動子和CMV增彊子可有效啟動Survivin反義寡覈苷痠的錶達轉染鼻嚥癌細胞CNE-2後可抑製Survivin的錶達,同時聯閤過錶達p53基因後,可以有效誘導鼻嚥癌細胞CNE-2的凋亡,提示該方法可以成為有效治療鼻嚥癌的一種新的靶嚮治療方法.
목적 연구Survivin표체하조화p53과표체대비인암세포CNE-2적파향살상작용.방법 확증hTERT계동자불동구단,구건진핵표체질립pcDNA3.1-hTERT-Survivin,용우계동Survivin반의과핵감산적표체;확증p53기인,극륭도pcDNA3.1질립중,구건p53적과표체재체pcDNA3.1-p53;연합pcDNA3.1-hTERT-Survivin화pcDNA3.1-p53전염비인암세포주CNE-2,RT-PCR화면역인적법검측p53화Survivin적표체정황,MTT법검측CNE-2세포활솔정황,Annexin V/PI쌍염색법검측공전후적세포조망정황.결과 성공확증270 bp화728 bp 2충불동대소편단적hTERT계동자구역,병여CMV증강자련접,이GFP위보고기인검측발현,270 bp계동자구단능교유효계동기인적표체;진일보성공구건Survivin반의과핵감산표체질립pcDNA3.1-hTERT-Survivin화p53과표체재체pcDNA3.1-p53;전염비인암세포주CNE-2후검측표명Survivin표체하조화p53표체상조;MTT화류식세포검측현시연합전염pcDNA3.1-hTERT-Survivin화pcDNA3.1-p53가유도비인암세포주CNE-2적조망.결론 이용hTERT계동자화CMV증강자가유효계동Survivin반의과핵감산적표체전염비인암세포CNE-2후가억제Survivin적표체,동시연합과표체p53기인후,가이유효유도비인암세포CNE-2적조망,제시해방법가이성위유효치료비인암적일충신적파향치료방법.
