中国海洋大学学报（自然科学版）
中國海洋大學學報（自然科學版）
중국해양대학학보（자연과학판）
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2011年
12期
58-62
,共5页
刘万顺%王娇%杨艳%韩宝芹%董文%刘光磊%池振明
劉萬順%王嬌%楊豔%韓寶芹%董文%劉光磊%池振明
류만순%왕교%양염%한보근%동문%류광뢰%지진명
壳聚糖酶%解脂耶氏酵母%表达%酶学性质
殼聚糖酶%解脂耶氏酵母%錶達%酶學性質
각취당매%해지야씨효모%표체%매학성질
为构建高效表达壳聚糖酶工程菌株,以Microbacterium sp.基因组为模板扩增壳聚糖酶基因,目的基因与表达载体pINA1317连接构建重组质粒,重组质粒Not Ⅰ酶切线性化后转化解脂耶氏酵母y.liPolytica Po1h.所得结果为PCR扩增得到约1000 bp的特异性片段,序列分析表明含有壳聚糖酶全长基因,开放阅读框801bp,编码266个氨基酸残基.转化子酶活力为10.4 U/mL,是原菌株酶活力的3.15倍.重组蛋白经DEAE-Sepharose FF分离纯化,达到电泳纯,SDS-PAGE显示单一条带,分子量约41 kDa.重组酶反应最适温度为45℃,最适pH为5.6,Km和Vmax分别是0.926mg/mL和6.15 U/mL.质谱分析酶解产物主要为三糖和五糖.实现了壳聚糖酶在解脂耶氏酵母中的分泌表达,为壳聚糖酶的工业化生产奠定了理论基础.
為構建高效錶達殼聚糖酶工程菌株,以Microbacterium sp.基因組為模闆擴增殼聚糖酶基因,目的基因與錶達載體pINA1317連接構建重組質粒,重組質粒Not Ⅰ酶切線性化後轉化解脂耶氏酵母y.liPolytica Po1h.所得結果為PCR擴增得到約1000 bp的特異性片段,序列分析錶明含有殼聚糖酶全長基因,開放閱讀框801bp,編碼266箇氨基痠殘基.轉化子酶活力為10.4 U/mL,是原菌株酶活力的3.15倍.重組蛋白經DEAE-Sepharose FF分離純化,達到電泳純,SDS-PAGE顯示單一條帶,分子量約41 kDa.重組酶反應最適溫度為45℃,最適pH為5.6,Km和Vmax分彆是0.926mg/mL和6.15 U/mL.質譜分析酶解產物主要為三糖和五糖.實現瞭殼聚糖酶在解脂耶氏酵母中的分泌錶達,為殼聚糖酶的工業化生產奠定瞭理論基礎.
위구건고효표체각취당매공정균주,이Microbacterium sp.기인조위모판확증각취당매기인,목적기인여표체재체pINA1317련접구건중조질립,중조질립Not Ⅰ매절선성화후전화해지야씨효모y.liPolytica Po1h.소득결과위PCR확증득도약1000 bp적특이성편단,서렬분석표명함유각취당매전장기인,개방열독광801bp,편마266개안기산잔기.전화자매활력위10.4 U/mL,시원균주매활력적3.15배.중조단백경DEAE-Sepharose FF분리순화,체도전영순,SDS-PAGE현시단일조대,분자량약41 kDa.중조매반응최괄온도위45℃,최괄pH위5.6,Km화Vmax분별시0.926mg/mL화6.15 U/mL.질보분석매해산물주요위삼당화오당.실현료각취당매재해지야씨효모중적분비표체,위각취당매적공업화생산전정료이론기출.
