中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2007年
9期
1832-1836
,共5页
胡永仙%俞康%谭映霞%吴建波%沈志坚%钱红兰%梁彬%单大铭
鬍永仙%俞康%譚映霞%吳建波%瀋誌堅%錢紅蘭%樑彬%單大銘
호영선%유강%담영하%오건파%침지견%전홍란%량빈%단대명
抗体%肿瘤%基因疗法%基因表达%NIH 3T3细胞
抗體%腫瘤%基因療法%基因錶達%NIH 3T3細胞
항체%종류%기인요법%기인표체%NIH 3T3세포
目的:构建pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体,并在NIH 3T3细胞株中表达.方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/IgGFc/CD80的真核表达载体pLNCX质粒上,转染NIH 3T3细胞株,经G418筛选细胞,用RT-PCR、流式细胞术检测目的基因表达情况.结果:经菌落PCR、酶切及一次测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的成功构建;经RT-PCR法,能够从转染的NIH 3T3细胞中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段,流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白.结论:重组表达载体pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的构建,并在NIH 3T3细胞株中的成功表达,为该重组质粒转染原代T淋巴细胞从而制备CD20靶向性嵌合锚定T细胞奠定了基础.
目的:構建pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的重組真覈錶達載體,併在NIH 3T3細胞株中錶達.方法:採用DNA重組技術把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/IgGFc/CD80的真覈錶達載體pLNCX質粒上,轉染NIH 3T3細胞株,經G418篩選細胞,用RT-PCR、流式細胞術檢測目的基因錶達情況.結果:經菌落PCR、酶切及一次測序鑒定均證實pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的成功構建;經RT-PCR法,能夠從轉染的NIH 3T3細胞中擴增齣1條與目的基因大小一緻的DNA片段,流式細胞術檢測顯示該目的基因能夠在NIH 3T3細胞中錶達目的蛋白.結論:重組錶達載體pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ的構建,併在NIH 3T3細胞株中的成功錶達,為該重組質粒轉染原代T淋巴細胞從而製備CD20靶嚮性嵌閤錨定T細胞奠定瞭基礎.
목적:구건pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ적중조진핵표체재체,병재NIH 3T3세포주중표체.방법:채용DNA중조기술파pBULLET상적CD28-ζcDNA삽입도이함anti-CD20 scFv/IgGFc/CD80적진핵표체재체pLNCX질립상,전염NIH 3T3세포주,경G418사선세포,용RT-PCR、류식세포술검측목적기인표체정황.결과:경균락PCR、매절급일차측서감정균증실pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ적성공구건;경RT-PCR법,능구종전염적NIH 3T3세포중확증출1조여목적기인대소일치적DNA편단,류식세포술검측현시해목적기인능구재NIH 3T3세포중표체목적단백.결론:중조표체재체pLNCX/anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ적구건,병재NIH 3T3세포주중적성공표체,위해중조질립전염원대T림파세포종이제비CD20파향성감합묘정T세포전정료기출.
