河南农业大学学报
河南農業大學學報
하남농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS HENANENSIS
2008年
3期
337-340
,共4页
关祥斌%王枫%冯振群%蒋士君
關祥斌%王楓%馮振群%蔣士君
관상빈%왕풍%풍진군%장사군
烟草%马铃薯Y病毒%外壳蛋白基因%克隆%原核表达
煙草%馬鈴藷Y病毒%外殼蛋白基因%剋隆%原覈錶達
연초%마령서Y병독%외각단백기인%극륭%원핵표체
采集河南自然发病的烟草.通过摩擦接种至实验室烟草后直接提取总RNA,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增获得了烟草马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-HN CP)基因;经Nde Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切处理的PCR产物,连接克隆至大肠杆菌表达栽体pET28a(+),构建了重组质粒pPVYCP,所获得的重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实正确插入了PVY-HN CP基因的全长ORF.序列分析表明,PVY-HN CP基因由804个核苷酸组成,编码267个氨基酸残基;重组的pPVYCP表达载体转化大肠杆茵BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导.SDS-PAGE电泳显示分子量为32 kDa的CP蛋白得到了诱导表达.
採集河南自然髮病的煙草.通過摩抆接種至實驗室煙草後直接提取總RNA,利用反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)擴增穫得瞭煙草馬鈴藷Y病毒外殼蛋白(PVY-HN CP)基因;經Nde Ⅰ和Sal Ⅰ雙酶切處理的PCR產物,連接剋隆至大腸桿菌錶達栽體pET28a(+),構建瞭重組質粒pPVYCP,所穫得的重組質粒經過酶切、測序鑒定,證實正確插入瞭PVY-HN CP基因的全長ORF.序列分析錶明,PVY-HN CP基因由804箇覈苷痠組成,編碼267箇氨基痠殘基;重組的pPVYCP錶達載體轉化大腸桿茵BL21(DE3)pLysS,經IPTG誘導.SDS-PAGE電泳顯示分子量為32 kDa的CP蛋白得到瞭誘導錶達.
채집하남자연발병적연초.통과마찰접충지실험실연초후직접제취총RNA,이용반전록-취합매련반응(RT-PCR)확증획득료연초마령서Y병독외각단백(PVY-HN CP)기인;경Nde Ⅰ화Sal Ⅰ쌍매절처리적PCR산물,련접극륭지대장간균표체재체pET28a(+),구건료중조질립pPVYCP,소획득적중조질립경과매절、측서감정,증실정학삽입료PVY-HN CP기인적전장ORF.서렬분석표명,PVY-HN CP기인유804개핵감산조성,편마267개안기산잔기;중조적pPVYCP표체재체전화대장간인BL21(DE3)pLysS,경IPTG유도.SDS-PAGE전영현시분자량위32 kDa적CP단백득도료유도표체.
