CAJ | 학술논문

背景:在神经干细胞移植治疗神经系统退行性变及修复神经系统功能损伤过程中,有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的定向诱导分化尤为关键.目的:以星形胶质细胞条件培养液为诱导剂,观察胎鼠室管膜前下区神经干细胞体外向多巴胺能神经元的分化.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-12/2007-08在解放军第三军医大学新桥医院实验中心完成.材料:清洁级新生2d龄KM小鼠15只,孕16d Wistar大鼠40只,均由解放军第三军医大学实验动物中心提供.方法:采用差速黏附法和振荡分离法纯化培养KM小鼠星形胶质细胞,收集传至第3代、培养5d的星形胶质细胞条件培养液,-20℃冻存待用.体外分离Wistar胎鼠室管膜前下区神经干细胞,加入含B27和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12无血清培养基进行原代培养,传至第3代后按0.5×108L-1密度接种,设立2组:对照组单纯加入含体积分数0.1为胎生血清的DMEM/F12培养基予以自然分化,实验组加入已制备的星形胶质细胞条件培养液进行诱导分化.主要观察指标:免疫细胞化学染色鉴定胎鼠室管膜前下区神经干细胞,流式细胞仪检测胎鼠室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化的阳性率.结果:培养的神经球细胞袁达巢蛋白,可分化为神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞.诱导分化7d后,实验组可见酪氨酸羟化酶阳性细胞,胞体呈圆形或椭圆形,酪氨酸羟化酶位于胞质及突起中;对照组酪氨酸羟化酶阳性细胞在数量、细胞成熟形态上均未达到实验组水平.实验组酪氨酸羟化酶阳性细胞分化率明显高于对照组(t=35.296,P<0.01).结论:在体外星形胶质细胞条件培养液可显著促进胎鼠室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化.
배경:재신경간세포이식치료신경계통퇴행성변급수복신경계통공능손상과정중,유효적신경간세포체외증식여다파알능신경원적정향유도분화우위관건.목적:이성형효질세포조건배양액위유도제,관찰태서실관막전하구신경간세포체외향다파알능신경원적분화.설계、시간급지점:세포학체외대조관찰,우2006-12/2007-08재해방군제삼군의대학신교의원실험중심완성.재료:청길급신생2d령KM소서15지,잉16d Wistar대서40지,균유해방군제삼군의대학실험동물중심제공.방법:채용차속점부법화진탕분리법순화배양KM소서성형효질세포,수집전지제3대、배양5d적성형효질세포조건배양액,-20℃동존대용.체외분리Wistar태서실관막전하구신경간세포,가입함B27화감성성섬유세포생장인자적DMEM/F12무혈청배양기진행원대배양,전지제3대후안0.5×108L-1밀도접충,설립2조:대조조단순가입함체적분수0.1위태생혈청적DMEM/F12배양기여이자연분화,실험조가입이제비적성형효질세포조건배양액진행유도분화.주요관찰지표:면역세포화학염색감정태서실관막전하구신경간세포,류식세포의검측태서실관막전하구신경간세포향다파알능신경원분화적양성솔.결과:배양적신경구세포원체소단백,가분화위신경원특이성희순화매、효질섬유산성단백양성세포.유도분화7d후,실험조가견락안산간화매양성세포,포체정원형혹타원형,락안산간화매위우포질급돌기중;대조조락안산간화매양성세포재수량、세포성숙형태상균미체도실험조수평.실험조락안산간화매양성세포분화솔명현고우대조조(t=35.296,P<0.01).결론:재체외성형효질세포조건배양액가현저촉진태서실관막전하구신경간세포향다파알능신경원분화.