中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2009年
2期
118-121
,共4页
黄月红%陈运新%张莉娟%郑伟达%陈治新%王小众
黃月紅%陳運新%張莉娟%鄭偉達%陳治新%王小衆
황월홍%진운신%장리연%정위체%진치신%왕소음
白细胞介素10%基因构建%基因表达%BRL细胞
白細胞介素10%基因構建%基因錶達%BRL細胞
백세포개소10%기인구건%기인표체%BRL세포
目的:建立稳定表达分泌型大鼠白细胞介素10(rIL-10)基因的正常大鼠肝细胞系(BRL细胞),为研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础.方法:通过RT-巢式PCR技术从大鼠外周血单核细胞(PBMC)中扩增出rIL-10全长基因,克隆入pcDNA3真核表达载体构建重组表达载体pcDNA3-rIL-10.鉴定正确后,用受体介导的脂质体转染试剂将pcDNA3-rIL-10转染BRL细胞,高浓度G418筛选,RT-PCR及ELISA法证实rIL-10在BRL细胞中的稳定表达.结果:构建的真核表达载体pcDNA3-rIL-10经质粒双酶切及测序鉴定证实载体构建的正确性.RT-PCR及ELISA法检测出经G418筛选的BRL细胞稳定表达IL-10.结论:成功构建分泌型pcDNA3-rIL-10真核表达质粒及筛选出稳定表达分泌型rIL-10的BRL细胞株,为进一步研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础.
目的:建立穩定錶達分泌型大鼠白細胞介素10(rIL-10)基因的正常大鼠肝細胞繫(BRL細胞),為研究IL-10抗纖維化的基因治療打下基礎.方法:通過RT-巢式PCR技術從大鼠外週血單覈細胞(PBMC)中擴增齣rIL-10全長基因,剋隆入pcDNA3真覈錶達載體構建重組錶達載體pcDNA3-rIL-10.鑒定正確後,用受體介導的脂質體轉染試劑將pcDNA3-rIL-10轉染BRL細胞,高濃度G418篩選,RT-PCR及ELISA法證實rIL-10在BRL細胞中的穩定錶達.結果:構建的真覈錶達載體pcDNA3-rIL-10經質粒雙酶切及測序鑒定證實載體構建的正確性.RT-PCR及ELISA法檢測齣經G418篩選的BRL細胞穩定錶達IL-10.結論:成功構建分泌型pcDNA3-rIL-10真覈錶達質粒及篩選齣穩定錶達分泌型rIL-10的BRL細胞株,為進一步研究IL-10抗纖維化的基因治療打下基礎.
목적:건립은정표체분비형대서백세포개소10(rIL-10)기인적정상대서간세포계(BRL세포),위연구IL-10항섬유화적기인치료타하기출.방법:통과RT-소식PCR기술종대서외주혈단핵세포(PBMC)중확증출rIL-10전장기인,극륭입pcDNA3진핵표체재체구건중조표체재체pcDNA3-rIL-10.감정정학후,용수체개도적지질체전염시제장pcDNA3-rIL-10전염BRL세포,고농도G418사선,RT-PCR급ELISA법증실rIL-10재BRL세포중적은정표체.결과:구건적진핵표체재체pcDNA3-rIL-10경질립쌍매절급측서감정증실재체구건적정학성.RT-PCR급ELISA법검측출경G418사선적BRL세포은정표체IL-10.결론:성공구건분비형pcDNA3-rIL-10진핵표체질립급사선출은정표체분비형rIL-10적BRL세포주,위진일보연구IL-10항섬유화적기인치료타하기출.
