CAJ | 학술논문

背景:由于骨髓间充质干细胞能分泌多种对退变胆碱能神经元有保护作用的神经营养因子,因此为阿尔茨海默病的治疗提供了新希望.目的:观察骨髓间充质干细胞分泌物对Aβ1～40损伤PC12细胞凋亡的保护作用.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-01/10在中国医科大学神经内科实验室完成.材料:体质量150 g左右的SD大鼠,雌雄不拘.方法:在体外培养、纯化骨髓间充质干细胞并收集其培养上清,实验分为4组:①空白对照组:在细胞培养体系中不加入任何药物和上清液.②骨髓间充质干细胞上清液组:细胞接种后24 h在细胞培养体系中加入骨髓间充质干细胞上清液30,60,120 已μL,并用体积分数为5%胎牛血清/RPMI 1640将终体积补足至300 μL,使其上清液体积分数分别为10%,20%,40%.③Aβ1～40损伤组:以10 mg/LAβ1～40刺激PC12细胞,终浓度为5,10,20 mg/L:换用1640培养24 h后,收集受损PC12上清培养液.④联合培养组:以10 mg/L Aβ1～40刺激PC12细胞过夜(阿尔茨海默病细胞模型),除去培养上清,换用1640培养24 h后,收集受损PC12上清作为条件培养液,分别给予骨髓间充质干细胞上清液30,60,120 μL,各组细胞给药后24 h和48 h进行指标检测.主要观察指标:①骨髓间充质干细胞表面抗原鉴定.②骨髓间充质干细胞分泌物对PC12细胞活力的影响.结果:骨髓单个核细胞培养2～5 d为生长潜伏期,细胞增殖较慢,细胞数变化不明显.6～12 d为细胞快速增殖期,排列有一定方向性,呈旋涡样生长.培养15～18 d,细胞出现80%～90%的融合,克隆间出现重叠.胰酶消化传代的细胞于12 h内完全贴壁、伸展并重新变为长梭形,生长迅速,7～10 d达到完全融合.骨髓间充质干细胞表面抗原的鉴定通过免疫荧光检测显示,CD45表达为阴性,证明其为非造血类细胞;CD44表达阳性.②Aβ1～40的终浓度为5,10,20 mg/L孵育24,48 h后,细胞活力与空白对照组相比均降低(P<0.01),且随着Aβ1-40质量浓度的增大,活力降低越明显.与Aβ1-40 mg/L孵育24,48 h组相比,联合培养组细胞活力上升,且相邻剂量间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);作用24,48 h骨髓间充质干细胞上清液组各浓度组与空白对照组相比,细胞活力没有变化.结论:骨髓间充质干细胞对Aβ1-40损伤的PC12细胞凋亡有保护作用,其保护作用的强弱与骨髓间充质干细胞上清液浓度有关. 揹景:由于骨髓間充質榦細胞能分泌多種對退變膽堿能神經元有保護作用的神經營養因子,因此為阿爾茨海默病的治療提供瞭新希望.目的:觀察骨髓間充質榦細胞分泌物對Aβ1～40損傷PC12細胞凋亡的保護作用.設計、時間及地點:隨機分組設計,對比觀察,于2008-01/10在中國醫科大學神經內科實驗室完成.材料:體質量150 g左右的SD大鼠,雌雄不拘.方法:在體外培養、純化骨髓間充質榦細胞併收集其培養上清,實驗分為4組:①空白對照組:在細胞培養體繫中不加入任何藥物和上清液.②骨髓間充質榦細胞上清液組:細胞接種後24 h在細胞培養體繫中加入骨髓間充質榦細胞上清液30,60,120 已μL,併用體積分數為5%胎牛血清/RPMI 1640將終體積補足至300 μL,使其上清液體積分數分彆為10%,20%,40%.③Aβ1～40損傷組:以10 mg/LAβ1～40刺激PC12細胞,終濃度為5,10,20 mg/L:換用1640培養24 h後,收集受損PC12上清培養液.④聯閤培養組:以10 mg/L Aβ1～40刺激PC12細胞過夜(阿爾茨海默病細胞模型),除去培養上清,換用1640培養24 h後,收集受損PC12上清作為條件培養液,分彆給予骨髓間充質榦細胞上清液30,60,120 μL,各組細胞給藥後24 h和48 h進行指標檢測.主要觀察指標:①骨髓間充質榦細胞錶麵抗原鑒定.②骨髓間充質榦細胞分泌物對PC12細胞活力的影響.結果:骨髓單箇覈細胞培養2～5 d為生長潛伏期,細胞增殖較慢,細胞數變化不明顯.6～12 d為細胞快速增殖期,排列有一定方嚮性,呈鏇渦樣生長.培養15～18 d,細胞齣現80%～90%的融閤,剋隆間齣現重疊.胰酶消化傳代的細胞于12 h內完全貼壁、伸展併重新變為長梭形,生長迅速,7～10 d達到完全融閤.骨髓間充質榦細胞錶麵抗原的鑒定通過免疫熒光檢測顯示,CD45錶達為陰性,證明其為非造血類細胞;CD44錶達暘性.②Aβ1～40的終濃度為5,10,20 mg/L孵育24,48 h後,細胞活力與空白對照組相比均降低(P<0.01),且隨著Aβ1-40質量濃度的增大,活力降低越明顯.與Aβ1-40 mg/L孵育24,48 h組相比,聯閤培養組細胞活力上升,且相鄰劑量間兩兩比較差異均有顯著性意義(P<0.05);作用24,48 h骨髓間充質榦細胞上清液組各濃度組與空白對照組相比,細胞活力沒有變化.結論:骨髓間充質榦細胞對Aβ1-40損傷的PC12細胞凋亡有保護作用,其保護作用的彊弱與骨髓間充質榦細胞上清液濃度有關.
배경:유우골수간충질간세포능분비다충대퇴변담감능신경원유보호작용적신경영양인자,인차위아이자해묵병적치료제공료신희망.목적:관찰골수간충질간세포분비물대Aβ1～40손상PC12세포조망적보호작용.설계、시간급지점:수궤분조설계,대비관찰,우2008-01/10재중국의과대학신경내과실험실완성.재료:체질량150 g좌우적SD대서,자웅불구.방법:재체외배양、순화골수간충질간세포병수집기배양상청,실험분위4조:①공백대조조:재세포배양체계중불가입임하약물화상청액.②골수간충질간세포상청액조:세포접충후24 h재세포배양체계중가입골수간충질간세포상청액30,60,120 이μL,병용체적분수위5%태우혈청/RPMI 1640장종체적보족지300 μL,사기상청액체적분수분별위10%,20%,40%.③Aβ1～40손상조:이10 mg/LAβ1～40자격PC12세포,종농도위5,10,20 mg/L:환용1640배양24 h후,수집수손PC12상청배양액.④연합배양조:이10 mg/L Aβ1～40자격PC12세포과야(아이자해묵병세포모형),제거배양상청,환용1640배양24 h후,수집수손PC12상청작위조건배양액,분별급여골수간충질간세포상청액30,60,120 μL,각조세포급약후24 h화48 h진행지표검측.주요관찰지표:①골수간충질간세포표면항원감정.②골수간충질간세포분비물대PC12세포활력적영향.결과:골수단개핵세포배양2～5 d위생장잠복기,세포증식교만,세포수변화불명현.6～12 d위세포쾌속증식기,배렬유일정방향성,정선와양생장.배양15～18 d,세포출현80%～90%적융합,극륭간출현중첩.이매소화전대적세포우12 h내완전첩벽、신전병중신변위장사형,생장신속,7～10 d체도완전융합.골수간충질간세포표면항원적감정통과면역형광검측현시,CD45표체위음성,증명기위비조혈류세포;CD44표체양성.②Aβ1～40적종농도위5,10,20 mg/L부육24,48 h후,세포활력여공백대조조상비균강저(P<0.01),차수착Aβ1-40질량농도적증대,활력강저월명현.여Aβ1-40 mg/L부육24,48 h조상비,연합배양조세포활력상승,차상린제량간량량비교차이균유현저성의의(P<0.05);작용24,48 h골수간충질간세포상청액조각농도조여공백대조조상비,세포활력몰유변화.결론:골수간충질간세포대Aβ1-40손상적PC12세포조망유보호작용,기보호작용적강약여골수간충질간세포상청액농도유관.