新疆农业大学学报
新疆農業大學學報
신강농업대학학보
JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
2期
137-141
,共5页
申卫红%马素贞%陈胜男%刘腾飞%陶玉成%简子健
申衛紅%馬素貞%陳勝男%劉騰飛%陶玉成%簡子健
신위홍%마소정%진성남%류등비%도옥성%간자건
犬瘟热病毒%N蛋白基因%克隆%原核表达%抗原性
犬瘟熱病毒%N蛋白基因%剋隆%原覈錶達%抗原性
견온열병독%N단백기인%극륭%원핵표체%항원성
参考GenBank中发表的CDV N蛋白基因序列,用Oligo6.0软件设计一对特异性引物,从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到1 572 bp的基因片段,将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDV N重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5α中,进行鉴定、测序.将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDV N重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、IPTG诱导表达.序列分析表明克隆的CDV N蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1 572个核苷酸,与GenBank中发表的CDV N蛋白基因序列相比同源率达到93.9%～99.1%.Western-blotting分析显示表达产物为84 kDa的融合蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的抗原性.
參攷GenBank中髮錶的CDV N蛋白基因序列,用Oligo6.0軟件設計一對特異性引物,從患犬瘟熱的犬全血樣品中提取總RNA,經RT-PCR擴增得到1 572 bp的基因片段,將其插入pMD18-T剋隆載體中構建瞭pMD18-CDV N重組質粒,將其轉入到大腸桿菌DH5α中,進行鑒定、測序.將目的基因與原覈錶達載體pGEX-4T-2連接構建瞭pGEX-4T-2-CDV N重組質粒,轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中,進行鑒定、測序、IPTG誘導錶達.序列分析錶明剋隆的CDV N蛋白基因從起始密碼子ATG開始到終止密碼子TAA結束全長為1 572箇覈苷痠,與GenBank中髮錶的CDV N蛋白基因序列相比同源率達到93.9%～99.1%.Western-blotting分析顯示錶達產物為84 kDa的融閤蛋白,可被犬瘟熱抗血清所識彆,具有良好的抗原性.
삼고GenBank중발표적CDV N단백기인서렬,용Oligo6.0연건설계일대특이성인물,종환견온열적견전혈양품중제취총RNA,경RT-PCR확증득도1 572 bp적기인편단,장기삽입pMD18-T극륭재체중구건료pMD18-CDV N중조질립,장기전입도대장간균DH5α중,진행감정、측서.장목적기인여원핵표체재체pGEX-4T-2련접구건료pGEX-4T-2-CDV N중조질립,전화도대장간균BL21(DE3)중,진행감정、측서、IPTG유도표체.서렬분석표명극륭적CDV N단백기인종기시밀마자ATG개시도종지밀마자TAA결속전장위1 572개핵감산,여GenBank중발표적CDV N단백기인서렬상비동원솔체도93.9%～99.1%.Western-blotting분석현시표체산물위84 kDa적융합단백,가피견온열항혈청소식별,구유량호적항원성.
