CAJ | 학술논문

目的构建携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法将线性化的慢病毒载体pGC-FU与抗基因RNA在In-Fusion交换酶作用下构建目的质粒pGC-agRNA,转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析.重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞NG108-15细胞的转染效率.结果抗基因RNA被成功构建入慢病毒表达载体pGC-FU,病毒滴度为2×109 TU/mL.用该慢病毒感染NG108-15细胞,当感染复数(MOI)为100时,感染效率大于95%.结论成功构建了携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体,为研究β-arrestin 2在μ阿片受体调控机制中的作用提供了有效的研究工具,而且为抗基因RNA技术应用于体内外实验研究奠定了基础.
목적 구건휴대β-arrestin 2항기인RNA적만병독표체재체병대기진행감정.방법 장선성화적만병독재체pGC-FU여항기인RNA재In-Fusion교환매작용하구건목적질립pGC-agRNA,전화감수태세포,대장출적극륭응용균락PCR감정,재대PCR감정양성적극륭진행측서화비대분석.중조병독질립여령외량충보조포장원건재체질립통과LipofectamineTM2000공전염293T세포,배양48 h후,수집세포배양상청액,장병독농축후재293T세포중측정병독적도,병검측만병독재체재공구세포NG108-15세포적전염효솔.결과 항기인RNA피성공구건입만병독표체재체pGC-FU,병독적도위2×109 TU/mL.용해만병독감염NG108-15세포,당감염복수(MOI)위100시,감염효솔대우95%.결론 성공구건료휴대β-arrestin 2항기인RNA적만병독표체재체,위연구β-arrestin 2재μ아편수체조공궤제중적작용제공료유효적연구공구,이차위항기인RNA기술응용우체내외실험연구전정료기출.