CAJ | 학술논문

背景:Toll样受体4 (toll-like receptor4,TLR4)是介导内毒素/脂多糖应答的主要受体,在由内毒素诱导的炎性反应的信号通路中发挥着重要作用.目的:构建人TLR4基因的RNA干扰慢病毒载体,并观察其对人脐静脉内皮细胞TLR4在蛋白水平的沉默效应.方法:利用Invitrogen在线软件设计人TLR4基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核苷酸后克隆到线性载体pENTRTM/H1/TO的黏性末端,并进行DNA测序.得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组反应,从而获得干扰TLR4基因真核表达的慢病毒载体.在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助复合体和TLR4基因的真核表达慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人脐静脉内皮细胞,检验其干扰TLR4基因表达的有效性.结果与结论:实验成功构建TLR4基因真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8.7×106 U/mL.免疫印迹杂交结果表明,所获得的慢病毒感染人脐静脉内皮细胞TLR4基因在蛋白水平的表达显著降低.实验成功构建了人TLR4基因慢病毒RNA干扰表达载体,并验证了其在人脐静脉内皮细胞上的有效性.
배경:Toll양수체4 (toll-like receptor4,TLR4)시개도내독소/지다당응답적주요수체,재유내독소유도적염성반응적신호통로중발휘착중요작용.목적:구건인TLR4기인적RNA간우만병독재체,병관찰기대인제정맥내피세포TLR4재단백수평적침묵효응.방법:이용Invitrogen재선연건설계인TLR4기인shRNA서렬,합성、퇴화형성쌍련과핵감산후극륭도선성재체pENTRTM/H1/TO적점성말단,병진행DNA측서.득도적양성중조자재여만병독재체진행중조반응,종이획득간우TLR4기인진핵표체적만병독재체.재지질체적개도하장만병독포장보조복합체화TLR4기인적진핵표체만병독재체도입293FT세포포장병독,측정병독적도,감염인제정맥내피세포,검험기간우TLR4기인표체적유효성.결과여결론:실험성공구건TLR4기인진핵표체만병독간우재체병획득상응적만병독,병독적도위8.7×106 U/mL.면역인적잡교결과표명,소획득적만병독감염인제정맥내피세포TLR4기인재단백수평적표체현저강저.실험성공구건료인TLR4기인만병독RNA간우표체재체,병험증료기재인제정맥내피세포상적유효성.