中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
20期
3679-3682
,共4页
于超生%文忠%邹泽红%陈惠芳%陶爱林
于超生%文忠%鄒澤紅%陳惠芳%陶愛林
우초생%문충%추택홍%진혜방%도애림
蛔虫%过敏原%ABA-1%密码子优化%组织构建
蛔蟲%過敏原%ABA-1%密碼子優化%組織構建
회충%과민원%ABA-1%밀마자우화%조직구건
背景:利用蛔虫基因融合技术,可将过敏原ABA-1的主要基因进行融合.目的:利用大肠杆菌表达系统重组表达蛔虫主要过敏原ABA-1融合蛋白.方法:从Gene Bank和Protein Database中获取蛔虫主要过敏原ABA-1基因和蛋白序列,选定其中的ABA-1B1,ABA-1A2与ABA-1A1基因重组为融合基因BAA,经密码子优化后,全基因合成目的基因BAA并构建于表达载体PET-44a上,经KCM法转化入大肠杆菌JM109中进行克隆,PET-44a/BAA经NdeⅠ和PstⅠ双酶切及DNA测序正确后,转化入大肠杆菌RosettaBlueTM中,经IPTG诱导表达.表达蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,通过Western blot和氨基酸测序鉴定目的蛋白.结果与结论:大肠杆菌的融合蛋白BAA表达量约占总蛋白的40%,纯化后蛋其白纯度可达90%左右.Western Blot结果显示在相对分子质量45 000处可见一特异目的条带,氨基酸测序显示N端15个氨基酸与目的蛋白完全相同.结果证实,融合蛋白BAA在大肠杆菌中得到高效的表达.
揹景:利用蛔蟲基因融閤技術,可將過敏原ABA-1的主要基因進行融閤.目的:利用大腸桿菌錶達繫統重組錶達蛔蟲主要過敏原ABA-1融閤蛋白.方法:從Gene Bank和Protein Database中穫取蛔蟲主要過敏原ABA-1基因和蛋白序列,選定其中的ABA-1B1,ABA-1A2與ABA-1A1基因重組為融閤基因BAA,經密碼子優化後,全基因閤成目的基因BAA併構建于錶達載體PET-44a上,經KCM法轉化入大腸桿菌JM109中進行剋隆,PET-44a/BAA經NdeⅠ和PstⅠ雙酶切及DNA測序正確後,轉化入大腸桿菌RosettaBlueTM中,經IPTG誘導錶達.錶達蛋白經Ni柱親和層析純化後,通過Western blot和氨基痠測序鑒定目的蛋白.結果與結論:大腸桿菌的融閤蛋白BAA錶達量約佔總蛋白的40%,純化後蛋其白純度可達90%左右.Western Blot結果顯示在相對分子質量45 000處可見一特異目的條帶,氨基痠測序顯示N耑15箇氨基痠與目的蛋白完全相同.結果證實,融閤蛋白BAA在大腸桿菌中得到高效的錶達.
배경:이용회충기인융합기술,가장과민원ABA-1적주요기인진행융합.목적:이용대장간균표체계통중조표체회충주요과민원ABA-1융합단백.방법:종Gene Bank화Protein Database중획취회충주요과민원ABA-1기인화단백서렬,선정기중적ABA-1B1,ABA-1A2여ABA-1A1기인중조위융합기인BAA,경밀마자우화후,전기인합성목적기인BAA병구건우표체재체PET-44a상,경KCM법전화입대장간균JM109중진행극륭,PET-44a/BAA경NdeⅠ화PstⅠ쌍매절급DNA측서정학후,전화입대장간균RosettaBlueTM중,경IPTG유도표체.표체단백경Ni주친화층석순화후,통과Western blot화안기산측서감정목적단백.결과여결론:대장간균적융합단백BAA표체량약점총단백적40%,순화후단기백순도가체90%좌우.Western Blot결과현시재상대분자질량45 000처가견일특이목적조대,안기산측서현시N단15개안기산여목적단백완전상동.결과증실,융합단백BAA재대장간균중득도고효적표체.
