南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
11期
1806-1811
,共6页
史静%胡晶%肖青%彭智%曹唯希%罗秋平%王方%冯文莉
史靜%鬍晶%肖青%彭智%曹唯希%囉鞦平%王方%馮文莉
사정%호정%초청%팽지%조유희%라추평%왕방%풍문리
Bcr-Ab1%SH2%DED%重组腺病毒%AD293细胞
Bcr-Ab1%SH2%DED%重組腺病毒%AD293細胞
Bcr-Ab1%SH2%DED%중조선병독%AD293세포
目的 构建表达SH2-DED融合基因的新型重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,观察其对K562细胞增殖的抑制作用.方法 重叠PCR扩增SH2-DED融合基因并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建成穿梭质粒pAdT-SD-EGFP并进行酶切和测序鉴定.穿梭质粒经PmeI酶切后转化pAd5F35-GFP的BJ5183感受态,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAd5F35-SD-EGFP及其突变体,PacI酶切后转染AD293细胞进行包装.重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP经PCR和western blot鉴定后进行病毒扩增和滴度测定.体外感染K562细胞,通过MTT和流式周期检测实验观察Ad5F35-SD-EGFP对K562细胞增殖的影响.结果 PCR、酶切和测序结果均表明pAdT-SD-EGFP和pAd5F35-SD-EGFP构建成功；PCR、EGFP检测结果证明重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP包装扩增成功,滴度可达1.4× 1012 pfu/ml.转染K562细胞后,Western blot可检测到目的蛋白的表达,MTT实验和流式周期检测结果证明其对K562细胞的增殖有明显的抑制作用.结论 成功构建并鉴定了携带SH2-DED融合基因的重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,其对BCR-ABL阳性K562细胞的增殖有明显的抑制作用.
目的 構建錶達SH2-DED融閤基因的新型重組腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,觀察其對K562細胞增殖的抑製作用.方法 重疊PCR擴增SH2-DED融閤基因併剋隆至腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV中,構建成穿梭質粒pAdT-SD-EGFP併進行酶切和測序鑒定.穿梭質粒經PmeI酶切後轉化pAd5F35-GFP的BJ5183感受態,通過細菌內同源重組產生重組腺病毒質粒pAd5F35-SD-EGFP及其突變體,PacI酶切後轉染AD293細胞進行包裝.重組腺病毒Ad5F35-SD-EGFP經PCR和western blot鑒定後進行病毒擴增和滴度測定.體外感染K562細胞,通過MTT和流式週期檢測實驗觀察Ad5F35-SD-EGFP對K562細胞增殖的影響.結果 PCR、酶切和測序結果均錶明pAdT-SD-EGFP和pAd5F35-SD-EGFP構建成功；PCR、EGFP檢測結果證明重組腺病毒Ad5F35-SD-EGFP包裝擴增成功,滴度可達1.4× 1012 pfu/ml.轉染K562細胞後,Western blot可檢測到目的蛋白的錶達,MTT實驗和流式週期檢測結果證明其對K562細胞的增殖有明顯的抑製作用.結論 成功構建併鑒定瞭攜帶SH2-DED融閤基因的重組腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,其對BCR-ABL暘性K562細胞的增殖有明顯的抑製作用.
목적 구건표체SH2-DED융합기인적신형중조선병독Ad5F35-SD-EGFP,관찰기대K562세포증식적억제작용.방법 중첩PCR확증SH2-DED융합기인병극륭지선병독천사재체pAdTrack-CMV중,구건성천사질립pAdT-SD-EGFP병진행매절화측서감정.천사질립경PmeI매절후전화pAd5F35-GFP적BJ5183감수태,통과세균내동원중조산생중조선병독질립pAd5F35-SD-EGFP급기돌변체,PacI매절후전염AD293세포진행포장.중조선병독Ad5F35-SD-EGFP경PCR화western blot감정후진행병독확증화적도측정.체외감염K562세포,통과MTT화류식주기검측실험관찰Ad5F35-SD-EGFP대K562세포증식적영향.결과 PCR、매절화측서결과균표명pAdT-SD-EGFP화pAd5F35-SD-EGFP구건성공；PCR、EGFP검측결과증명중조선병독Ad5F35-SD-EGFP포장확증성공,적도가체1.4× 1012 pfu/ml.전염K562세포후,Western blot가검측도목적단백적표체,MTT실험화류식주기검측결과증명기대K562세포적증식유명현적억제작용.결론 성공구건병감정료휴대SH2-DED융합기인적중조선병독Ad5F35-SD-EGFP,기대BCR-ABL양성K562세포적증식유명현적억제작용.
