北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2005年
1期
58-63
,共6页
钟昌高%李麓芸%陆长富%林戈%卢光琇
鐘昌高%李麓蕓%陸長富%林戈%盧光琇
종창고%리록예%륙장부%림과%로광수
聚合酶链反应%植入前诊断%β地中海贫血
聚閤酶鏈反應%植入前診斷%β地中海貧血
취합매련반응%식입전진단%β지중해빈혈
目的: 对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨.方法:针对β-珠蛋白基因CD41-42、IVS-Ⅱ654突变位点区域采用二重巢式PCR,分别以不同的引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用98 ℃预变性扩增单个淋巴细胞和/或单卵裂球,了解这些因素对PCR扩增效率的影响.结果: 不同的引物浓度组中,终浓度为0.25 μmol/L R1+F1引物对与 0.3 μmol/L R2+F2引物对配对扩增效率最高;不同的Taq DNA聚合酶中TaKaRa EX Taq的扩增效率最高;中和缓冲液-1(200 mmol/L Tricine)的扩增效率显著高于中和缓冲液-2(900 mmol/L Tris·HCl, pH 8.3/300 mmol/L KCl/200 mmol/L HCl)的扩增效率(P<0.05);单细胞PCR反应前采用98 ℃预变性与不采用98 ℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义.结论:不同引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异,而PCR反应前采用98 ℃预变性不能提高PCR扩增效率.
目的: 對影響單細胞二重巢式PCR擴增的因素進行初步探討.方法:針對β-珠蛋白基因CD41-42、IVS-Ⅱ654突變位點區域採用二重巢式PCR,分彆以不同的引物濃度組閤、不同的Taq DNA聚閤酶、不同的中和緩遲液、PCR反應前採用或不採用98 ℃預變性擴增單箇淋巴細胞和/或單卵裂毬,瞭解這些因素對PCR擴增效率的影響.結果: 不同的引物濃度組中,終濃度為0.25 μmol/L R1+F1引物對與 0.3 μmol/L R2+F2引物對配對擴增效率最高;不同的Taq DNA聚閤酶中TaKaRa EX Taq的擴增效率最高;中和緩遲液-1(200 mmol/L Tricine)的擴增效率顯著高于中和緩遲液-2(900 mmol/L Tris·HCl, pH 8.3/300 mmol/L KCl/200 mmol/L HCl)的擴增效率(P<0.05);單細胞PCR反應前採用98 ℃預變性與不採用98 ℃預變性的擴增效率間差異無統計學意義.結論:不同引物濃度組閤、不同的Taq DNA聚閤酶、不同的中和緩遲液對單細胞的二重巢式PCR的擴增效率存在明顯差異,而PCR反應前採用98 ℃預變性不能提高PCR擴增效率.
목적: 대영향단세포이중소식PCR확증적인소진행초보탐토.방법:침대β-주단백기인CD41-42、IVS-Ⅱ654돌변위점구역채용이중소식PCR,분별이불동적인물농도조합、불동적Taq DNA취합매、불동적중화완충액、PCR반응전채용혹불채용98 ℃예변성확증단개림파세포화/혹단란렬구,료해저사인소대PCR확증효솔적영향.결과: 불동적인물농도조중,종농도위0.25 μmol/L R1+F1인물대여 0.3 μmol/L R2+F2인물대배대확증효솔최고;불동적Taq DNA취합매중TaKaRa EX Taq적확증효솔최고;중화완충액-1(200 mmol/L Tricine)적확증효솔현저고우중화완충액-2(900 mmol/L Tris·HCl, pH 8.3/300 mmol/L KCl/200 mmol/L HCl)적확증효솔(P<0.05);단세포PCR반응전채용98 ℃예변성여불채용98 ℃예변성적확증효솔간차이무통계학의의.결론:불동인물농도조합、불동적Taq DNA취합매、불동적중화완충액대단세포적이중소식PCR적확증효솔존재명현차이,이PCR반응전채용98 ℃예변성불능제고PCR확증효솔.
