军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2005年
2期
124-126,131
,共4页
吴伟立%李彦英%苗林%徐金森%方宏清%陈惠鹏
吳偉立%李彥英%苗林%徐金森%方宏清%陳惠鵬
오위립%리언영%묘림%서금삼%방굉청%진혜붕
尿酸氧化酶%重组蛋白质类%大肠杆菌%共价交联%聚合酶链反应
尿痠氧化酶%重組蛋白質類%大腸桿菌%共價交聯%聚閤酶鏈反應
뇨산양화매%중조단백질류%대장간균%공개교련%취합매련반응
目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶.方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillus flavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urate oxidase,UO,EC 1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌 BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株.经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品.SDS-PAGE分析样品纯度.用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量.结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达 99%,其酶比活力可达35 U/mg.经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103.交联后相对分子质量为160×103.结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体.
目的:在大腸桿菌內錶達具有活性的黃麯黴尿痠氧化酶.方法:用重疊PCR從黃麯黴(Aspergillus flavus)3.1398中釣取瞭尿痠氧化酶(urate oxidase,UO,EC 1.7.3.3)基因,剋隆到原覈錶達載體pET22b中,轉化大腸桿菌 BL21(DE3),篩選到高錶達的重組轉化子菌株.經乳糖誘導目的蛋白錶達,陰離子交換柱純化,穫得純品.SDS-PAGE分析樣品純度.用尿痠緩遲液測定酶活性,用戊二醛交聯結閤質譜法測定相對分子質量.結果:目的蛋白為胞內可溶性錶達,錶達量達菌體總蛋白的35%,純化後的樣品純度達 99%,其酶比活力可達35 U/mg.經質譜測定重組UO單體的相對分子質量為34×103.交聯後相對分子質量為160×103.結論:黃麯黴尿痠氧化酶可在大腸桿菌中可溶錶達,併具有活性,其活性形式為四聚體.
목적:재대장간균내표체구유활성적황곡매뇨산양화매.방법:용중첩PCR종황곡매(Aspergillus flavus)3.1398중조취료뇨산양화매(urate oxidase,UO,EC 1.7.3.3)기인,극륭도원핵표체재체pET22b중,전화대장간균 BL21(DE3),사선도고표체적중조전화자균주.경유당유도목적단백표체,음리자교환주순화,획득순품.SDS-PAGE분석양품순도.용뇨산완충액측정매활성,용무이철교련결합질보법측정상대분자질량.결과:목적단백위포내가용성표체,표체량체균체총단백적35%,순화후적양품순도체 99%,기매비활력가체35 U/mg.경질보측정중조UO단체적상대분자질량위34×103.교련후상대분자질량위160×103.결론:황곡매뇨산양화매가재대장간균중가용표체,병구유활성,기활성형식위사취체.
