CAJ | 학술논문

核糖体基因区打靶载体pHrn是本室构建的人源基因载体之一,为探讨其在肝癌基因治疗的作用,本研究构建了pHr-CeTpCDUPRT/GFP质粒载体并进行了肝癌的体内外治疗实验研究.该质粒载体以pHrn载体为骨架,CMV+hTERT启动子作为转录调控元件,CDUPRT/GFP自杀融合基因为目的基因.体外转染肝癌细胞BEL7402后,流式细胞仪检测转染效率为30%～50%;RT-PCR和Western blotting结果表明,有CDUPRT表达;HPLC检测5-FC可转化为5-FU,给药后12 h 5-FU浓度达60.15 μg/mL;四唑盐(Methylthiazolyl tetrazolium,MTT)分析结果显示,200～800μg/mL 5-FC使BEL7402的平均存活率为60%～35%.同时,对裸鼠肝癌模型进行瘤内转染,结果显示,当持续注射质粒和前体药物治疗时,裸鼠肿瘤生长明显被抑制,甚至体积稍有缩小;RT-PCR检测结果表明,瘤内有CDUPRT表达;HPLC检测裸鼠血清中的5-FU浓度为7.694 μg/mL;肿瘤组织病理切片显示,大量肿瘤细胞坏死.这些结果为实际应用此载体进行肝癌基因治疗提供了重要的实验依据.
핵당체기인구타파재체pHrn시본실구건적인원기인재체지일,위탐토기재간암기인치료적작용,본연구구건료pHr-CeTpCDUPRT/GFP질립재체병진행료간암적체내외치료실험연구.해질립재체이pHrn재체위골가,CMV+hTERT계동자작위전록조공원건,CDUPRT/GFP자살융합기인위목적기인.체외전염간암세포BEL7402후,류식세포의검측전염효솔위30%～50%;RT-PCR화Western blotting결과표명,유CDUPRT표체;HPLC검측5-FC가전화위5-FU,급약후12 h 5-FU농도체60.15 μg/mL;사서염(Methylthiazolyl tetrazolium,MTT)분석결과현시,200～800μg/mL 5-FC사BEL7402적평균존활솔위60%～35%.동시,대라서간암모형진행류내전염,결과현시,당지속주사질립화전체약물치료시,라서종류생장명현피억제,심지체적초유축소;RT-PCR검측결과표명,류내유CDUPRT표체;HPLC검측라서혈청중적5-FU농도위7.694 μg/mL;종류조직병리절편현시,대량종류세포배사.저사결과위실제응용차재체진행간암기인치료제공료중요적실험의거.