中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2006年
19期
111-114
,共4页
食管肿瘤/中药疗法%食管肿瘤/放射疗法%口服液%细胞凋亡%蛋白质p53
食管腫瘤/中藥療法%食管腫瘤/放射療法%口服液%細胞凋亡%蛋白質p53
식관종류/중약요법%식관종류/방사요법%구복액%세포조망%단백질p53
目的:观察以养阴润燥、清热解毒为基本治法组方的中药复方制剂地黄管食通口服液对放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡的影响,分析该口服液作用机制.方法:实验于2004-11/2005-08在郑州大学动物实验中心SPF级实验室(动物实验)和郑州大学分子医学重点实验室(其他实验)完成.①选用清洁级Wistar大鼠125只,6～8周龄,雌雄不拘.取20只大鼠作为空白对照组;其余大鼠均皮下注射甲基戊基亚硝胺溶液5 mg/kg造成食管癌模型,每周1次,连续16周,每周称体质量1次,根据体质量增长调节注射给药量.末次大鼠注射给予甲基戊基亚硝胺溶液后,除20只大鼠(模型组)外,将其余造模大鼠用氯胺酮腹腔注射麻醉(0.1g/kg,2 mL/kg),应用60Co放射治疗机进行大鼠食管局部60Co照射,剂量为2 Gy/d,连续5 d.②末次照射24 h后,分别给予相应受试药物,动物分组及给药情况如下:空白对照组(n=20):灌胃蒸馏水10 mL/(kg·d);模型组(n=20):灌胃蒸馏水10 mL/(kg·d);放疗组(n=17):灌胃蒸馏水10 mL/(kg·d);六味地黄丸组(n=17):灌胃六味地黄丸(成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹皮、茯苓;河南宛西制药股份有限公司生产,批号:20010691;9 g/粒)生药含量4.5 g/(kg·d);地黄管食通口服液低、中、高剂量组(n=17):灌胃地黄管食通口服液(地黄管食通口服液:成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹疫、茯苓、山豆根、冬凌草;由河南中医学院第一临床医学院制剂中心提供,批号:020117;10 mL/支)生药含量0.5,1.0,1.5g/(kg·d).每组均干预5周.③采用原位末端标记法检测细胞凋亡情况,计数细胞凋亡比例的均数为凋亡指数.④采用免疫组化方法检测P53,Bcl-2蛋白表达:P53和Bcl-2蛋白阳性反应均呈棕黄色颗粒,按显色有无及阳性细胞多少可分为4个等级:阴性(-):整个切片未见阳性染色;弱阳性(+):阳性细胞数＜25%;中度阳性(++):阳性细胞数25%～50%;强阳性(+++):阳性细胞数＞50%.⑤两组计量和计数资料差异比较采用t检验和x2检验.结果:纳入125.只大鼠,各组取10只用于结果分析.①细胞凋亡指数:地黄管食通各剂量组明显高于模型组(P＜0.05～0.01),六味地黄丸组和地黄管食通各剂量组明显高于放疗组(P＜0.05～0.01).②P53蛋白表达阳性率:模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组(P＜0.05～0.01).地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组(P＜0.05～0.01),以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显(P＜0.01).③Bcl-2蛋白表达阳性率:模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组(P＜0.05～0.01).地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组(P＜0.05～0.01),以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显(P＜0.01).结论:地黄管食通口服液可促进放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡,该作用发生可能与抑制P53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达有关.
目的:觀察以養陰潤燥、清熱解毒為基本治法組方的中藥複方製劑地黃管食通口服液對放射療法治療後食管癌細胞凋亡的影響,分析該口服液作用機製.方法:實驗于2004-11/2005-08在鄭州大學動物實驗中心SPF級實驗室(動物實驗)和鄭州大學分子醫學重點實驗室(其他實驗)完成.①選用清潔級Wistar大鼠125隻,6～8週齡,雌雄不拘.取20隻大鼠作為空白對照組;其餘大鼠均皮下註射甲基戊基亞硝胺溶液5 mg/kg造成食管癌模型,每週1次,連續16週,每週稱體質量1次,根據體質量增長調節註射給藥量.末次大鼠註射給予甲基戊基亞硝胺溶液後,除20隻大鼠(模型組)外,將其餘造模大鼠用氯胺酮腹腔註射痳醉(0.1g/kg,2 mL/kg),應用60Co放射治療機進行大鼠食管跼部60Co照射,劑量為2 Gy/d,連續5 d.②末次照射24 h後,分彆給予相應受試藥物,動物分組及給藥情況如下:空白對照組(n=20):灌胃蒸餾水10 mL/(kg·d);模型組(n=20):灌胃蒸餾水10 mL/(kg·d);放療組(n=17):灌胃蒸餾水10 mL/(kg·d);六味地黃汍組(n=17):灌胃六味地黃汍(成分為熟地黃、山藥、山茱萸、澤瀉、牡丹皮、茯苓;河南宛西製藥股份有限公司生產,批號:20010691;9 g/粒)生藥含量4.5 g/(kg·d);地黃管食通口服液低、中、高劑量組(n=17):灌胃地黃管食通口服液(地黃管食通口服液:成分為熟地黃、山藥、山茱萸、澤瀉、牡丹疫、茯苓、山豆根、鼕凌草;由河南中醫學院第一臨床醫學院製劑中心提供,批號:020117;10 mL/支)生藥含量0.5,1.0,1.5g/(kg·d).每組均榦預5週.③採用原位末耑標記法檢測細胞凋亡情況,計數細胞凋亡比例的均數為凋亡指數.④採用免疫組化方法檢測P53,Bcl-2蛋白錶達:P53和Bcl-2蛋白暘性反應均呈棕黃色顆粒,按顯色有無及暘性細胞多少可分為4箇等級:陰性(-):整箇切片未見暘性染色;弱暘性(+):暘性細胞數＜25%;中度暘性(++):暘性細胞數25%～50%;彊暘性(+++):暘性細胞數＞50%.⑤兩組計量和計數資料差異比較採用t檢驗和x2檢驗.結果:納入125.隻大鼠,各組取10隻用于結果分析.①細胞凋亡指數:地黃管食通各劑量組明顯高于模型組(P＜0.05～0.01),六味地黃汍組和地黃管食通各劑量組明顯高于放療組(P＜0.05～0.01).②P53蛋白錶達暘性率:模型組、放療組、六味地黃汍組均明顯高于空白對照組(P＜0.05～0.01).地黃管食通口服液各劑量組明顯低于放療組(P＜0.05～0.01),以地黃管食通口服液高劑量組與放療組差異最明顯(P＜0.01).③Bcl-2蛋白錶達暘性率:模型組、放療組、六味地黃汍組均明顯高于空白對照組(P＜0.05～0.01).地黃管食通口服液各劑量組明顯低于放療組(P＜0.05～0.01),以地黃管食通口服液高劑量組與放療組差異最明顯(P＜0.01).結論:地黃管食通口服液可促進放射療法治療後食管癌細胞凋亡,該作用髮生可能與抑製P53蛋白錶達,下調Bcl-2蛋白錶達有關.
목적:관찰이양음윤조、청열해독위기본치법조방적중약복방제제지황관식통구복액대방사요법치료후식관암세포조망적영향,분석해구복액작용궤제.방법:실험우2004-11/2005-08재정주대학동물실험중심SPF급실험실(동물실험)화정주대학분자의학중점실험실(기타실험)완성.①선용청길급Wistar대서125지,6～8주령,자웅불구.취20지대서작위공백대조조;기여대서균피하주사갑기무기아초알용액5 mg/kg조성식관암모형,매주1차,련속16주,매주칭체질량1차,근거체질량증장조절주사급약량.말차대서주사급여갑기무기아초알용액후,제20지대서(모형조)외,장기여조모대서용록알동복강주사마취(0.1g/kg,2 mL/kg),응용60Co방사치료궤진행대서식관국부60Co조사,제량위2 Gy/d,련속5 d.②말차조사24 h후,분별급여상응수시약물,동물분조급급약정황여하:공백대조조(n=20):관위증류수10 mL/(kg·d);모형조(n=20):관위증류수10 mL/(kg·d);방료조(n=17):관위증류수10 mL/(kg·d);륙미지황환조(n=17):관위륙미지황환(성분위숙지황、산약、산수유、택사、모단피、복령;하남완서제약고빈유한공사생산,비호:20010691;9 g/립)생약함량4.5 g/(kg·d);지황관식통구복액저、중、고제량조(n=17):관위지황관식통구복액(지황관식통구복액:성분위숙지황、산약、산수유、택사、모단역、복령、산두근、동릉초;유하남중의학원제일림상의학원제제중심제공,비호:020117;10 mL/지)생약함량0.5,1.0,1.5g/(kg·d).매조균간예5주.③채용원위말단표기법검측세포조망정황,계수세포조망비례적균수위조망지수.④채용면역조화방법검측P53,Bcl-2단백표체:P53화Bcl-2단백양성반응균정종황색과립,안현색유무급양성세포다소가분위4개등급:음성(-):정개절편미견양성염색;약양성(+):양성세포수＜25%;중도양성(++):양성세포수25%～50%;강양성(+++):양성세포수＞50%.⑤량조계량화계수자료차이비교채용t검험화x2검험.결과:납입125.지대서,각조취10지용우결과분석.①세포조망지수:지황관식통각제량조명현고우모형조(P＜0.05～0.01),륙미지황환조화지황관식통각제량조명현고우방료조(P＜0.05～0.01).②P53단백표체양성솔:모형조、방료조、륙미지황환조균명현고우공백대조조(P＜0.05～0.01).지황관식통구복액각제량조명현저우방료조(P＜0.05～0.01),이지황관식통구복액고제량조여방료조차이최명현(P＜0.01).③Bcl-2단백표체양성솔:모형조、방료조、륙미지황환조균명현고우공백대조조(P＜0.05～0.01).지황관식통구복액각제량조명현저우방료조(P＜0.05～0.01),이지황관식통구복액고제량조여방료조차이최명현(P＜0.01).결론:지황관식통구복액가촉진방사요법치료후식관암세포조망,해작용발생가능여억제P53단백표체,하조Bcl-2단백표체유관.
