中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2007年
3期
293-301
,共9页
周国岭%宋崴%付湘辉%辛立%唐晓彬%冯冬晓%刘光%刘德培
週國嶺%宋崴%付湘輝%辛立%唐曉彬%馮鼕曉%劉光%劉德培
주국령%송외%부상휘%신립%당효빈%풍동효%류광%류덕배
珠蛋白基因簇%转基因鼠%染色质构象
珠蛋白基因簇%轉基因鼠%染色質構象
주단백기인족%전기인서%염색질구상
目的 用人珠蛋白转基因鼠模型建立染色质构象捕获的技术体系,探讨人α类珠蛋白基因簇的染色质构象变化与基因表达调控的关系.方法 使人α类珠蛋白转基因纯合子公鼠与KM母鼠交配,从怀孕14.5 d的母鼠体内取出珠蛋白基因表达组织胎肝和非表达组织胎脑细胞,用甲醛交联固定细胞核内的染色质构象,限制性内切酶NcoⅠ消化后用T4 DNA连接酶连接,解交联后提取并纯化连接的基因组DNA,在连接位点的两侧设计引物,用半定量PCR分析胎肝和胎脑中人α类珠蛋白基因簇染色质构象模式.结果 以含HS40的限制性酶切片段作固定片段时,在胎脑中其他限制性酶切片段与其交联效率随线型距离增加而降低;而在胎肝中,表达的珠蛋白基因α2、α1的酶切片段与其交联效率明显高于胎脑,含有已关闭珠蛋白基因ζ的酶切片段与其交联效率与胎脑相当.以含α2的限制性酶切片段作固定片段时,在胎脑中其他限制性酶切片段与其交联效率随线型距离增加而降低;而在胎肝中,上游调控元件HS 40和33与其交联效率明显高于胎脑;HS 10和8与其交联效率略低于胎脑.结论 在表达组织中,人α类珠蛋白基因簇上游远端调控元件通过形成染色质环与下游表达基因靠近,从而调控α类珠蛋白基因的表达;而在非表达组织中,无此染色质环形成.
目的 用人珠蛋白轉基因鼠模型建立染色質構象捕穫的技術體繫,探討人α類珠蛋白基因簇的染色質構象變化與基因錶達調控的關繫.方法 使人α類珠蛋白轉基因純閤子公鼠與KM母鼠交配,從懷孕14.5 d的母鼠體內取齣珠蛋白基因錶達組織胎肝和非錶達組織胎腦細胞,用甲醛交聯固定細胞覈內的染色質構象,限製性內切酶NcoⅠ消化後用T4 DNA連接酶連接,解交聯後提取併純化連接的基因組DNA,在連接位點的兩側設計引物,用半定量PCR分析胎肝和胎腦中人α類珠蛋白基因簇染色質構象模式.結果 以含HS40的限製性酶切片段作固定片段時,在胎腦中其他限製性酶切片段與其交聯效率隨線型距離增加而降低;而在胎肝中,錶達的珠蛋白基因α2、α1的酶切片段與其交聯效率明顯高于胎腦,含有已關閉珠蛋白基因ζ的酶切片段與其交聯效率與胎腦相噹.以含α2的限製性酶切片段作固定片段時,在胎腦中其他限製性酶切片段與其交聯效率隨線型距離增加而降低;而在胎肝中,上遊調控元件HS 40和33與其交聯效率明顯高于胎腦;HS 10和8與其交聯效率略低于胎腦.結論 在錶達組織中,人α類珠蛋白基因簇上遊遠耑調控元件通過形成染色質環與下遊錶達基因靠近,從而調控α類珠蛋白基因的錶達;而在非錶達組織中,無此染色質環形成.
목적 용인주단백전기인서모형건립염색질구상포획적기술체계,탐토인α류주단백기인족적염색질구상변화여기인표체조공적관계.방법 사인α류주단백전기인순합자공서여KM모서교배,종부잉14.5 d적모서체내취출주단백기인표체조직태간화비표체조직태뇌세포,용갑철교련고정세포핵내적염색질구상,한제성내절매NcoⅠ소화후용T4 DNA련접매련접,해교련후제취병순화련접적기인조DNA,재련접위점적량측설계인물,용반정량PCR분석태간화태뇌중인α류주단백기인족염색질구상모식.결과 이함HS40적한제성매절편단작고정편단시,재태뇌중기타한제성매절편단여기교련효솔수선형거리증가이강저;이재태간중,표체적주단백기인α2、α1적매절편단여기교련효솔명현고우태뇌,함유이관폐주단백기인ζ적매절편단여기교련효솔여태뇌상당.이함α2적한제성매절편단작고정편단시,재태뇌중기타한제성매절편단여기교련효솔수선형거리증가이강저;이재태간중,상유조공원건HS 40화33여기교련효솔명현고우태뇌;HS 10화8여기교련효솔략저우태뇌.결론 재표체조직중,인α류주단백기인족상유원단조공원건통과형성염색질배여하유표체기인고근,종이조공α류주단백기인적표체;이재비표체조직중,무차염색질배형성.
