中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2007年
4期
241-246
,共6页
柏世玉%黄清玲%李晖%王林%郑瑾%林建银%林旭
柏世玉%黃清玲%李暉%王林%鄭瑾%林建銀%林旭
백세옥%황청령%리휘%왕림%정근%림건은%림욱
乙型肝炎病毒%肝细胞癌%基质金属蛋白酶%组织金属蛋白酶抑制物
乙型肝炎病毒%肝細胞癌%基質金屬蛋白酶%組織金屬蛋白酶抑製物
을형간염병독%간세포암%기질금속단백매%조직금속단백매억제물
目的 全面分析乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)对基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)及组织金属蛋白酶抑制物(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases,TIMPs)的影响,探讨其在肝细胞癌的侵袭转移中的可能作用. 方法 PCR扩增HBV X基因并克隆入真核表达载体pcDNA3.1/HisC,重组载体及空载体分别以Lipofectamine2000转染HepG2细胞并以800 μg/mlG418筛选抗性细胞克隆.以Western blot检测抗性细胞HBx表达.抽提细胞总RNA,半定量RT-PCR检测MMPs及TIMPs.收集细胞培养液上清,以明胶酶谱检测MMP2及MMP9活性,反相明胶酶谱检测TIMPs活性. 结果 构建了HBx重组载体pcDNA3.1-XB.该重组载体及对照空载体转染HepG2细胞后,G418筛选,分别获得抗性细胞克隆HepG2-XB及HepG2-HIS,前者经Western blot证实可表达HBx.半定量RT-PCR显示HBx可促进MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24及TIMP1、4基因的转录,抑制MMP1、3、8、9、10、11、12、15、20及TIMP2、3基因的转录.明胶酶谱检测显示HBx可促进酶原MMP2(Pro-MMP2)及活性MMP9(Active-MMP9)表达,抑制酶原MMP9(Pro-MMP9)表达;反相明胶酶谱显示HBx可促进TIMP1、TIMP4的表达,同时抑制TIMP2及糖基化TIMP3的表达. 结论 HBx蛋白对MMPs、TIMPs转录表达的影响是多方面的,但这种影响在HBx促进肝癌细胞侵袭转移过程中的确切机制有待进一步阐明.
目的 全麵分析乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)對基質金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)及組織金屬蛋白酶抑製物(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases,TIMPs)的影響,探討其在肝細胞癌的侵襲轉移中的可能作用. 方法 PCR擴增HBV X基因併剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1/HisC,重組載體及空載體分彆以Lipofectamine2000轉染HepG2細胞併以800 μg/mlG418篩選抗性細胞剋隆.以Western blot檢測抗性細胞HBx錶達.抽提細胞總RNA,半定量RT-PCR檢測MMPs及TIMPs.收集細胞培養液上清,以明膠酶譜檢測MMP2及MMP9活性,反相明膠酶譜檢測TIMPs活性. 結果 構建瞭HBx重組載體pcDNA3.1-XB.該重組載體及對照空載體轉染HepG2細胞後,G418篩選,分彆穫得抗性細胞剋隆HepG2-XB及HepG2-HIS,前者經Western blot證實可錶達HBx.半定量RT-PCR顯示HBx可促進MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24及TIMP1、4基因的轉錄,抑製MMP1、3、8、9、10、11、12、15、20及TIMP2、3基因的轉錄.明膠酶譜檢測顯示HBx可促進酶原MMP2(Pro-MMP2)及活性MMP9(Active-MMP9)錶達,抑製酶原MMP9(Pro-MMP9)錶達;反相明膠酶譜顯示HBx可促進TIMP1、TIMP4的錶達,同時抑製TIMP2及糖基化TIMP3的錶達. 結論 HBx蛋白對MMPs、TIMPs轉錄錶達的影響是多方麵的,但這種影響在HBx促進肝癌細胞侵襲轉移過程中的確切機製有待進一步闡明.
목적 전면분석을형간염병독X단백(Hepatitis B virus X protein,HBx)대기질금속단백매(Matrix Metalloproteinases,MMPs)급조직금속단백매억제물(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases,TIMPs)적영향,탐토기재간세포암적침습전이중적가능작용. 방법 PCR확증HBV X기인병극륭입진핵표체재체pcDNA3.1/HisC,중조재체급공재체분별이Lipofectamine2000전염HepG2세포병이800 μg/mlG418사선항성세포극륭.이Western blot검측항성세포HBx표체.추제세포총RNA,반정량RT-PCR검측MMPs급TIMPs.수집세포배양액상청,이명효매보검측MMP2급MMP9활성,반상명효매보검측TIMPs활성. 결과 구건료HBx중조재체pcDNA3.1-XB.해중조재체급대조공재체전염HepG2세포후,G418사선,분별획득항성세포극륭HepG2-XB급HepG2-HIS,전자경Western blot증실가표체HBx.반정량RT-PCR현시HBx가촉진MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24급TIMP1、4기인적전록,억제MMP1、3、8、9、10、11、12、15、20급TIMP2、3기인적전록.명효매보검측현시HBx가촉진매원MMP2(Pro-MMP2)급활성MMP9(Active-MMP9)표체,억제매원MMP9(Pro-MMP9)표체;반상명효매보현시HBx가촉진TIMP1、TIMP4적표체,동시억제TIMP2급당기화TIMP3적표체. 결론 HBx단백대MMPs、TIMPs전록표체적영향시다방면적,단저충영향재HBx촉진간암세포침습전이과정중적학절궤제유대진일보천명.
