CAJ | 학술논문

为了构建一种新型的造血干细胞和基质细胞动态共培养体系,脐带血单个核细胞和包埋有兔骨髓间充质干细胞的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠(alginate-chitosan-alginate, ACA)微胶囊在旋转壁式生物反应器(rotating wall vessel, RWV)中进行了7d动态悬浮共培养.培养液不含血清,补充多种生长因子(SCF 50ng·mL-1,FL 50ng·mL-1,TPO 50ng·mL-1及IL-325ng·mL-1).每24h进行总有核细胞计数,并测量培养液的pH和渗透压,在0h、72h和168h进行流式CD34+细胞分析以及集落形成能力检验.结果表明在RWV动态共培养过程中,培养液的pH保持在7.2~7.4,渗透压保持在280~310mmOsmol·kg-1,均适合造血干/祖细胞的体外扩增.经过7d的无血清动态共培养,总有核细胞、CD34+细胞以及混合集落(colony-forming units in culture, CFU-Cs)分别扩增了107.05±6.08,26.52±1.5和19.2±3.18倍.这种新型的动态微囊化共培养体系支持了造血干/祖细胞的大规模体外扩增,基质细胞抑制了造血干/祖细胞的分化,微胶囊对造血细胞和基质细胞进行了免疫隔离,RWV则为细胞和微胶囊提供了优良的低剪切力的悬浮培养环境.
위료구건일충신형적조혈간세포화기질세포동태공배양체계,제대혈단개핵세포화포매유토골수간충질간세포적해조산납-각취당-해조산납(alginate-chitosan-alginate, ACA)미효낭재선전벽식생물반응기(rotating wall vessel, RWV)중진행료7d동태현부공배양.배양액불함혈청,보충다충생장인자(SCF 50ng·mL-1,FL 50ng·mL-1,TPO 50ng·mL-1급IL-325ng·mL-1).매24h진행총유핵세포계수,병측량배양액적pH화삼투압,재0h、72h화168h진행류식CD34+세포분석이급집락형성능력검험.결과표명재RWV동태공배양과정중,배양액적pH보지재7.2~7.4,삼투압보지재280~310mmOsmol·kg-1,균괄합조혈간/조세포적체외확증.경과7d적무혈청동태공배양,총유핵세포、CD34+세포이급혼합집락(colony-forming units in culture, CFU-Cs)분별확증료107.05±6.08,26.52±1.5화19.2±3.18배.저충신형적동태미낭화공배양체계지지료조혈간/조세포적대규모체외확증,기질세포억제료조혈간/조세포적분화,미효낭대조혈세포화기질세포진행료면역격리,RWV칙위세포화미효낭제공료우량적저전절력적현부배양배경.