泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2008年
3期
269-272
,共4页
王丽%李洪%张志霞%刘晓燕%谢华福%宋杰%梅志强
王麗%李洪%張誌霞%劉曉燕%謝華福%宋傑%梅誌彊
왕려%리홍%장지하%류효연%사화복%송걸%매지강
流行性乙型脑炎病毒%E蛋白基因%反转录-聚合酶链反应%基因克隆%表达载体
流行性乙型腦炎病毒%E蛋白基因%反轉錄-聚閤酶鏈反應%基因剋隆%錶達載體
류행성을형뇌염병독%E단백기인%반전록-취합매련반응%기인극륭%표체재체
目的;获得JEV E蛋白基因,构建重组表达载体并在E.coli中高效表达.方法:参照GeneBank中的日本乙型脑炎病毒SA14-14株序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因全长,克隆至PUCm-T载体,经测序证实后克隆至原核表达载体pET32a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析.结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了JEV E蛋白基因全长1500bp,成功构建了重组质粒pET-32a/JEV E,SDS-PAGE分析显示目的蛋白主要以包涵体的形式在大肠杆菌中获得表达,表达量占总菌体蛋白的35%.结论:在大肠杆菌中成功表达了JEV E蛋白,为ELISA早期诊断试剂盒的研制和E蛋白基因结构与功能的分析奠定了基础.
目的;穫得JEV E蛋白基因,構建重組錶達載體併在E.coli中高效錶達.方法:參照GeneBank中的日本乙型腦炎病毒SA14-14株序列設計一對特異性引物,採用RT-PCR法擴增E基因全長,剋隆至PUCm-T載體,經測序證實後剋隆至原覈錶達載體pET32a中,轉化入BL21(DE3),IPTG誘導錶達,對錶達產物進行SDS-PAGE電泳分析.結果:限製性覈痠內切酶酶切鑒定、PCR和覈痠序列分析錶明,擴增齣瞭JEV E蛋白基因全長1500bp,成功構建瞭重組質粒pET-32a/JEV E,SDS-PAGE分析顯示目的蛋白主要以包涵體的形式在大腸桿菌中穫得錶達,錶達量佔總菌體蛋白的35%.結論:在大腸桿菌中成功錶達瞭JEV E蛋白,為ELISA早期診斷試劑盒的研製和E蛋白基因結構與功能的分析奠定瞭基礎.
목적;획득JEV E단백기인,구건중조표체재체병재E.coli중고효표체.방법:삼조GeneBank중적일본을형뇌염병독SA14-14주서렬설계일대특이성인물,채용RT-PCR법확증E기인전장,극륭지PUCm-T재체,경측서증실후극륭지원핵표체재체pET32a중,전화입BL21(DE3),IPTG유도표체,대표체산물진행SDS-PAGE전영분석.결과:한제성핵산내절매매절감정、PCR화핵산서렬분석표명,확증출료JEV E단백기인전장1500bp,성공구건료중조질립pET-32a/JEV E,SDS-PAGE분석현시목적단백주요이포함체적형식재대장간균중획득표체,표체량점총균체단백적35%.결론:재대장간균중성공표체료JEV E단백,위ELISA조기진단시제합적연제화E단백기인결구여공능적분석전정료기출.
